[發明專利]同時檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病病原體的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201711048324.2
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107557445B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 李偉;張翠萍
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京易捷勝知識產權代理事務所(普通合伙) 11613
• 代理人: 齊勝杰

本發明涉及一組用于同時檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的三種病原體的核酸、試劑盒和檢測方法，其中，用于多重PCR同時檢測三種病原體的核酸包括導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的三種病原體的上、下游引物；用于熒光定量PCR同時檢測三種病原體的核酸還包括有各病原體對應的探針。本發明還建立了一種比較高效、靈敏的，可同時檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的病原體這三種病原的檢測方法。該方法能有效提高檢測的靈敏度，避免假陰性結果的發生，為能有效預防秋海棠會發生立枯病、斑點病和白粉病提供一種技術手段。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術，具體涉及一種用于同時檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的病原體的核酸、試劑盒及方法。

背景技術

秋海棠是中國的傳統名花之一，該類群植物花朵鮮艷美麗，體態多姿，花期較長，易于栽培，長期以來作園藝和美化庭院的觀賞植物。少數種類可供藥用，秋海棠在我國園林綠化中起著重要的作用，近年來海棠立枯病、斑點病和白粉病的發病率不斷上升，三者復合侵染的情況越來越多，每年給我國秋海棠種植的農戶造成巨大損失。目前尚缺乏秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的高效殺菌劑和抗病品種，一旦發現有感染這三種病害，需要及時清除病樹，防止病害蔓延此外，還要加強非疫區的管理，防止這三種病害的侵入，因此，針對秋海棠立枯病、斑點病和白粉病建立早期快速檢測方法就顯得尤為重要。

秋海棠立枯病的癥狀是初近土面的莖基部染病生暗色斑點，擴展后變為棕褐色腐爛狀；葉片染病生暗綠色水漬狀圓形病斑，侵染葉柄時現褐色腐爛；濕度大的早晨可見病斑處長有白色至淺褐色茵絲狀物；發病重的病株倒伏或腐爛死亡；其病原體為立枯絲核菌。

秋海棠斑點病的癥狀是葉上初生水浸汰小斑點，逐漸擴大，成為大型不規則型的褐色病斑。葉片病斑沿葉脈擴展呈黑色水浸狀，進而向莖部發展。莖部病斑為縱向細長干腐狀，病斑繞莖一周，使受害處以上枯萎，以后受害部干枯、縊縮。其致病病原體為野油菜黃單胞菌秋海棠致病型細菌。

秋海棠白粉病的癥狀是葉兩面生白色斑片，邊緣無定形，以后互相愈合無明顯病斑，嚴重時葉哭死，植株早衰，球莖變小，影響次年生產；其主要病原體為秋海棠白粉菌。其菌絲體在葉兩面生，花及葉柄生，以菌絲體和子囊果在病殘體上越冬，次年氣流傳播，分生孢子或子囊孢子萌發后，芽管直接侵入，又多次再侵染。

針對導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的三種病原體的檢測方法，目前尚無能夠快速、同時檢測這三種病原體的方法。

發明內容

(一)要解決的技術問題

為了解決上述技術問題，本發明提供一種用于多重PCR同時檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的病原體的核酸，還提供了采用多重實時熒光定量PCR檢測導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的病原體的核酸、試劑盒及其檢測方法。

(二)技術方案

為了達到上述目的，本發明采用的主要技術方案包括：

一組用于多重PCR同時檢測三種病原體的核酸，其包括用于檢測分別導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的三種病原體的上、下游引物，其中，所述立枯病病原體的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；

所述斑點病病原體的上游引物序列如SEQ ID No.4所示，下游引物序列如SEQ IDNo.5所示；

所述白粉病病原體的上游引物序列如SEQ ID No.7所示，下游引物序列如SEQ IDNo.8所示。

一組用于熒光定量PCR同時檢測三種病原體的核酸，其包括如上所述的分別導致秋海棠立枯病、斑點病和白粉病的三種病原體的上、下游引物及各病原體對應的探針，其中，

所述立枯病病原體的探針序列如SEQ ID No.3所示；