[發(fā)明專利]一種基于明月草的黃酮的提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711046763.X | 申請日： | 2017-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN107823233A | 公開（公告）日： | 2018-03-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 尹偉;韓麗娟;陳婷;馬秋麗;李真真;曹殿潔;張國升 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽新華學(xué)院 |
| 主分類號： | A61K36/232 | 分類號： | A61K36/232;A01H4/00;A01G31/00;A01G24/15;A01G24/28;A01G24/10 |
| 代理公司： | 合肥維可專利代理事務(wù)所(普通合伙)34135 | 代理人： | 吳明華 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 明月 黃酮 提取 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)加工領(lǐng)域，涉及一種基于明月草的黃酮的提取方法。
背景技術(shù)
明月草為菊科三七屬植物，又名白子菜、白東楓、玉枇杷、三百棒、厚面皮、雞菜、大肥牛、白番莧等，分布于臺灣至華南、西南一代，喜生于潮濕的陰地上。其根莖肥大、肉質(zhì)，呈團塊狀，徑2-3cm，新鮮時灰黃色，側(cè)生莖芽多枚。
明月草全省均可入藥，其味辛、淡；性平，具有清熱、舒筋、止血、祛瘀等功效，能夠治療百日咳、風(fēng)濕痛、骨折、創(chuàng)傷出血、降血糖、肺結(jié)核等功能。現(xiàn)代研究表明，其具有的藥用和保健功能，與其含有的豐富總黃酮類具有密切的關(guān)系。黃酮類屬于植物次生代寫產(chǎn)物，是多種中藥發(fā)揮生理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前，黃酮獲得研究較多，一般均是從植物提取角度著手，比如溶劑提取。常規(guī)溶劑提取法具有提取率低、提取雜質(zhì)多等問題。針對明月草特異的黃酮的提取方法，目前研究較為單一，不能很好地在降低成本、提高效率的基礎(chǔ)上，最大程度獲得高純度黃酮。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高明月草總黃酮獲得率，解決目前明月草的黃酮獲得過程效率不高、純度較低等問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
本發(fā)明提供一種基于明月草的黃酮的提取方法，該方法包括如下步驟：
(1)組織培養(yǎng)：取明月草葉片作為外植體，在無菌操作條件下，以葉片背面接于改良MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)分化得到愈傷組織，其中，改良MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基添加有1.5-2.2mg/L的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)，0.1-0.3mg/L的萘乙酸(NAA),1.3-1.7mg/L的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，pH5.5-6；暗培養(yǎng)8-10天后，轉(zhuǎn)入光照強度為1000-1500Lx培養(yǎng)室中，保持濕度80-85％，培養(yǎng)8-10天；繼代培養(yǎng)2-3代后轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中，其中，分化培養(yǎng)基為0.2-0.4mg/L的萘乙酸、2-5％質(zhì)量分數(shù)蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基；1500-2000Lx光照強度下，培養(yǎng)20-30天，獲得試管苗；
(2)水培：將試管苗接種于水培液中，其中，添加有40-45mg/L的MnSO4、6.0-7.0mg/L的ZnSO4；自然光下，培養(yǎng)8-10天，獲得明月草幼苗；
(3)大棚種植：按照草炭：蛭石：細砂按體積比(3-5):(0.5-1.5):(0.5-1.5)配制混合培養(yǎng)基；將明月草幼苗種植于混合培養(yǎng)基中，自然光下，培養(yǎng)5-8天后，按照1500-2000kg/畝施入腐熟有機肥；4-5個月后收獲明月草莖葉；適時通風(fēng)、灌溉；
(4)總黃酮提取：將明月草莖葉自然風(fēng)干，剪切莖葉至2-3mm小塊，粉碎過20-30目篩；按照料液比1:30-1:40比例添加50％-60％體積分數(shù)乙醇，浸泡90-120min，獲得黃酮浸膏。
上述提高明月草總黃酮獲得率的方法，其中，水培液中添加(20-25)：(75-80)的Ca(NO3)2和(NH4)SO4，總氮素水平為3-4mmol/L。
上述提高白背明月草總黃酮獲得率的方法，其中，水培液中添加28-32g/L的蔗糖作為碳源。
所述提高明月草總黃酮獲得率的方法，其中，明月草每年大棚種植時間為5月和10月，10月和次年5月收割。
上述的一種基于明月草的黃酮的提取方法，其中，步驟(4)之后，將黃酮浸膏以及浸渣一起放置于循環(huán)回流裝置中進行回流提取，60-70℃條件下，回流提取3-4次，每次60-90min。
上述的一種基于明月草的黃酮的提取方法，其中，在回流提取次數(shù)間隔之間，將浸膏和浸渣放置于功率為360-480W微波下浸提1.5-2.5min；隨后，將浸膏連同料渣一起進入下一次回流提取過程。
上述的一種基于明月草的黃酮的提取方法，其中，浸提結(jié)束后，將浸膏減壓濃縮30-40min；采用聚酰胺樹脂動態(tài)吸附濃縮液進行純化，其中，洗脫液為70-75％乙醇，洗脫時間為2-4BV/h。
上述一種基于明月草的黃酮的提取方法，其中，聚酰胺樹脂純化過程中，樹脂藥材比為1.5:1-2:1；樹脂徑高比為1:8-1:10。
上述一種基于明月草的黃酮的提取方法，其中，上樣pH保持為2.9-3.1；清洗pH保持為2-4。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的一種基于明月草的黃酮的提取方法具有如下優(yōu)點：
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