[發(fā)明專利]一種基于明月草的黃酮的提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711046763.X
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107823233A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹偉;韓麗娟;陳婷;馬秋麗;李真真;曹殿潔;張國升
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽新華學(xué)院
• 主分類號: A61K36/232
• 分類號: A61K36/232;A01H4/00;A01G31/00;A01G24/15;A01G24/28;A01G24/10
• 代理公司: 合肥維可專利代理事務(wù)所(普通合伙)34135
• 代理人: 吳明華

1.一種基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)組織培養(yǎng)：取明月草葉片作為外植體，在無菌操作條件下，以葉片背面接于改良MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)分化得到愈傷組織，其中，改良MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基添加有1.5-2.2mg/L的6-芐氨基腺嘌呤，0.1-0.3mg/L的萘乙酸,1.3-1.7mg/L的聚乙烯吡咯烷酮，pH5.5-6；暗培養(yǎng)8-10天后，轉(zhuǎn)入光照強度為1000-1500Lx培養(yǎng)室中，保持濕度80-85％，培養(yǎng)8-10天；繼代培養(yǎng)2-3代后轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中，其中，分化培養(yǎng)基為0.2-0.4mg/L的萘乙酸、2-5％質(zhì)量分?jǐn)?shù)蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基；1500-2000Lx光照強度下，培養(yǎng)20-30天，獲得試管苗；

(2)水培：將試管苗接種于水培液中，其中，添加有40-45mg/L的MnSO₄、6.0-7.0mg/L的Zn SO₄；自然光下，培養(yǎng)8-10天，獲得明月草幼苗；

(3)大棚種植：按照草炭：蛭石：細(xì)砂按體積比(3-5):(0.5-1.5):(0.5-1.5)配制混合培養(yǎng)基；將明月草幼苗種植于混合培養(yǎng)基中，自然光下，培養(yǎng)5-8天后，按照1500-2000kg/畝施入腐熟有機肥；4-5個月后收獲明月草莖葉；適時通風(fēng)、灌溉；

(4)黃酮提取：將明月草莖葉自然風(fēng)干，剪切莖葉至2-3mm小塊，粉碎過20-30目篩；按照料液比1:30-1:40比例添加50％-60％體積分?jǐn)?shù)乙醇，浸泡90-120min，獲得黃酮浸膏。

2.基于權(quán)利要求1所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：水培液中添加質(zhì)量比(20-25)：(75-80)的Ca(NO₃)₂和(NH₄)₂SO₄，總氮素水平為0.25-0.35g/L。

3.基于權(quán)利要求1所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：水培液中添加28-32g/L的蔗糖作為碳源。

4.基于權(quán)利要求1所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：明月草每年大棚種植時間為5月和10月，10月和次年5月收割。

5.基于權(quán)利要求4所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：步驟(4)之后，將黃酮浸膏以及浸渣一起放置于循環(huán)回流裝置中進(jìn)行回流提取，60-70℃條件下，回流提取3-4次，每次60-90min。

6.基于權(quán)利要求5所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：在回流提取次數(shù)間隔之間，將浸膏和浸渣放置于功率為360-480W微波下浸提1.5-2.5min；隨后，將浸膏連同料渣一起進(jìn)入下一次回流提取過程。

7.基于權(quán)利要求5或6所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：浸提結(jié)束后，將浸膏減壓濃縮30-40min，保證含生藥量≥0.1g/ml；采用聚酰胺樹脂動態(tài)吸附濃縮液進(jìn)行純化，其中，洗脫液為70-75％質(zhì)量濃度乙醇，加樣、洗脫速度為2-4BV/h。

8.基于權(quán)利要求7所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：聚酰胺樹脂純化過程中，樹脂藥材比為1.5:1-2:1；樹脂徑高比為1:8-1:10。

9.基于權(quán)利要求8所述的基于明月草的黃酮的提取方法，其特征在于：上樣pH保持為2.9-3.1；清洗pH保持為2-4。