[發明專利]一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法

在審

• 申請號: 201711044865.8
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107831124A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 李陽;余璐璐;宋全芳;嚴峰;張廣民
• 申請（專利權）人: 北京挑戰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 黃玉玨

技術領域

本發明涉及一種飼料有效磷仿生評定法，特別是涉及一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法。

背景技術

磷(Phosphorus)是動植物體內的必需礦物元素，是繼蛋白質和能量之外的第三昂貴的飼料原料?？陀^、準確評定各種飼料原料的生物學效價是動物營養需要量研究、優化飼料配方的基礎，是提高畜禽日糧利用率、降低日糧成本及養殖業節能減排的決策依據。飼料磷生物學效價的評定方法主要有體內法(in vivo)和體外法(in vitro)。體內法耗資、費力、費時，系統誤差和偶然誤差影響因素多，不同時空條件下的測值重演性、可比性差不能滿足研究和生產應用所需。而體外法具有快速、簡便、費用低等優點，各國營養學家都有諸多研究報道。近年來，飼料磷的體外評定技術在國際上越來越受到關注，從而推動了相關研究的快速發展，其中以Zyla等(1995)和Liu等(1997，1998)所建立的方法應用最為廣泛。然而這些體外法大都以三角瓶、試管、透析管等簡單實驗器材為基礎，由于大量的人工操作引入的系統誤差所得結果可重復性和精度較差。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供一種畜禽飼料有效性與安全性評價過程中飼料仿生消化后所釋放的磷的含量測定方法。

在系統總結生長豬消化道主要消化酶變異規律的基礎上，設計出模擬杜×長×大三元雜交生長豬在典型飼糧條件下的酶譜與水解環境，開發了可全自動模擬豬體內消化過程的單胃動物仿生消化系統(SDS-3)。模擬動物消化道內環境，飼料在單胃動物仿生消化系統完成模擬30kg生長豬的體內消化過程，水解產物通過釩鉬酸銨測定消化液中磷的總量。同時，測定試樣的干物質含量。以計算每克絕干飼料克釋放的無機磷總量作為飼料有效磷的總量值，有效磷占總磷的百分比為磷的消化率。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法，采用單胃動物仿生消化系統運行模擬消化過程，其特征在于，包括以下步驟：

1)樣品處理：樣品采集后將樣品粉碎至過孔徑0.30mm試驗篩；

2)胃模擬消化：飼料樣品置于玻璃模擬消化管中，取胃緩沖液和模擬胃液加入消化管中，將消化管安裝在帶有攪拌電機的單胃動物方式消化系統的立式模塊上，將立式專用模塊架置于單胃動物仿生消化系統中，設定相應參數進行胃模擬消化；

3)小腸模擬消化：胃模擬消化結束時，小腸緩沖液注入消化管中，然后通過蠕動泵將自動入模擬消化管中，設定小腸階段模擬消化的參數進行小腸消化；

4)消化殘渣的處理：消化結束后，將玻璃消化管內的消化液用水沖洗干凈無損失地轉移到容量瓶中，用水準確定容至刻度，搖勻備用，取消化液與三氯乙酸以6:4比例混合后靜置10min，離心10min，上清液備用；同樣方法制備樣品空白上清液；

5)制作磷含量標準曲線；

6)消化液中磷含量測定，移取上清液至試管中，加入釩鉬酸銨顯色劑搖勻，室溫下放置10min，用比色皿在波長415nm處測定吸光值；準確移取樣品空白上清液至試管中，加入釩鉬酸銨顯色劑，搖勻，室溫下放置10min，用比色皿在波長415nm處測定吸光值；

7)實驗管OD₄₁₅值與空白管OD₄₁₅值之差，代入標準曲線中計算無機磷濃度；

8)計算有效磷含量X1，

有效磷含量

式中：

X₁為有效磷含量，％；

a為標準曲線回歸系數；

b為標準曲線回歸常數；

OD₁—測定管的吸光度值；

OD₂—無飼料空白管的吸光度值；

m—飼料樣品重量(g)；

DM為飼料樣品的干物質含量；

9)磷的消化率

X1—有效磷含量(％)；

X—飼料中總磷含量(％)。

P—磷的消化率。

胃階段模擬消化的參數為：溫度39℃，蠕動泵轉速188rpm/min，消化時間4h；小腸階段模擬消化的參數為：溫度39℃，蠕動泵轉速188rpm/min，小腸消化時間為16h。