[發明專利]一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法

在審

• 申請號: 201711044865.8
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107831124A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 李陽;余璐璐;宋全芳;嚴峰;張廣民
• 申請（專利權）人: 北京挑戰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 黃玉玨

1.一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法，采用單胃動物仿生消化系統運行模擬消化過程，其特征在于，包括以下步驟：

1)樣品處理：樣品采集后將樣品粉碎至過孔徑0.30mm試驗篩；

2)胃模擬消化：飼料樣品置于玻璃模擬消化管中，取胃緩沖液和模擬胃液加入消化管中，將消化管安裝在帶有攪拌電機的單胃動物方式消化系統的立式模塊上，將立式專用模塊架置于單胃動物仿生消化系統中，設定相應參數進行胃模擬消化；

3)小腸模擬消化：胃模擬消化結束時，小腸緩沖液注入消化管中，然后通過蠕動泵將自動入模擬消化管中，設定小腸階段模擬消化的參數進行小腸消化；

4)消化殘渣的處理：消化結束后，將玻璃消化管內的消化液用水沖洗干凈無損失地轉移到容量瓶中，用水準確定容至刻度，搖勻備用，取消化液與三氯乙酸以6:4比例混合后靜置10min，離心10min，上清液備用；同樣方法制備樣品空白上清液；

5)制作磷含量標準曲線；

6)消化液中磷含量測定，移取上清液至試管中，加入釩鉬酸銨顯色劑搖勻，室溫下放置10min，用比色皿在波長415nm處測定吸光值；準確移取樣品空白上清液至試管中，加入釩鉬酸銨顯色劑，搖勻，室溫下放置10min，用比色皿在波長415nm處測定吸光值；

7)實驗管OD₄₁₅值與空白管OD₄₁₅值之差，代入標準曲線中計算無機磷濃度；

8)計算有效磷含量X1，

有效磷含量

式中：

X₁為有效磷含量，％；

a為標準曲線回歸系數；

b為標準曲線回歸常數；

OD₁—測定管的吸光度值；

OD₂—無飼料空白管的吸光度值；

m—飼料樣品重量(g)；

DM為飼料樣品的干物質含量；

9)磷的消化率

P(%)=X1X]]>

X1—有效磷含量(％)；

X—飼料中總磷含量(％)；

P—磷的消化率。

2.根據權利要求1所述的一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法，其特征在于，階段模擬消化的參數為：溫度39℃，蠕動泵轉速188rpm/min，消化時間4h；小腸階段模擬消化的參數為：溫度39℃，蠕動泵轉速188rpm/min，小腸消化時間為16h。

3.根據權利要求1所述的一種飼料中有效磷含量的仿生消化測定方法，其特征在于，所述胃緩沖液的配制方法為：稱取14.705g二水合檸檬酸三鈉，2.59g氯化鈉，0.25g氯化鉀放入500mL燒杯中，加入400ml去離子水溶解，并用6mol/L鹽酸或氫氧化鈉在39℃下調節溶液的pH至2.50，冷卻后轉入500mL容量瓶，并用去離子水定容；所述小腸緩沖液為：稱取18.165gTris，2.6g氫氧化鈉放入500ml燒杯中，加去離子水溶解，轉入500ml容量瓶并定容至刻度；模擬胃液：稱取147.5KU的胃蛋白酶溶解于100ml pH 2.50的胃緩沖液中，緩慢攪拌30min；模擬小腸液為：稱取豬液素0.81g溶解于20ml去離子水中，磁力攪拌溶解30min，作為模擬腸液。