[發明專利]一種水產養殖用半固體微生態制劑的制備方法

有效

• 申請號: 201711033775.9
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107574136B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 吳偉;潘瑩;鄭堯;陳樹橋;周國勤
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心;南京市水產科學研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/16;A23K10/18;C12R1/07;C12R1/225;C12R1/02;C12R1/865;C12R1/72
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅;張仕婷

1.一種水產養殖用半固體微生態制劑的制備方法，其特征是按重量份計：該微生態制劑為含水30%~35%的半固體制劑，由按液體菌比例，納豆芽孢桿菌CICC 10454 14~16份、嗜酸乳桿菌CICC 21007 25~32份、醋化醋桿菌CICC 21684 13~17份、釀酒酵母CICC 1005 25~30份和產阮假絲酵母CICC 1769 13~15份混合得到混合菌，在30~35℃發酵溫度下以麩皮、次粉和醬油渣為基礎制備的固體培養基上發酵80~120h，真空包裝得到水產養殖用半固體微生態制劑。

2.如權利要求1所述水產養殖用半固體微生態制劑的制備方法，其特征是所述的固體發酵培養基，其組份比例按重量份數計：麩皮，粗蛋白含量≥15%，48~60份，次粉，粗蛋白含量≥15%，18~23份，醬油渣，粗蛋白含量≥12%，鹽份≤6%，18~35份，于室溫下混合均勻，于烘箱中100℃滅菌15min，冷卻后備用。

3.如權利要求1所述水產養殖用半固體微生態制劑的制備方法，其特征是具體步驟如下：

（1）納豆芽孢桿菌的培養：從試管斜面上取一環納豆芽孢桿菌（Basillus natto ），CICC 10454，接種到30~100 mL滅菌的肉湯培養基中，于30~32 ℃、100~125 r·min^-1搖床上培養22~30 h，然后將其接入0.8~1 L經滅菌的肉湯培養基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1搖床上培養32~40 h，制成菌種種子液備用，此時菌液的活菌數≥10⁹ CFU· mL^-1；

（2）乳酸桿菌的培養：從試管斜面上取一環嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus），CICC 21007，接種到30~100mL滅菌的MRS液體培養基中，于33~37 ℃靜置培養32~40h，然后將其接入0.8~1L經滅菌的MRS液體培養基中，于33~37℃靜置培養32~40h，制成菌種種子液備用，此時菌液的活菌數≥10⁹ CFU·mL^-1；

（3）釀酒酵母和產朊假絲酵母的培養：分別從試管斜面上取一環釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），CICC 1005和產朊假絲酵母（Candida utilis），CICC 1769，分別接種到30~100 mL滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1搖床上培養22~30 h，然后將其分別接入0.8~1L經滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1搖床上培養22~30h，制成菌種種子液備用，此時菌液的活菌數≥10⁹ CFU· mL^-1；

（4）醋化醋桿菌的培養：從試管斜面上取一環醋化醋桿菌（Acetobacter aceti），CICC21684，接種到30~100mL滅菌的醋酸菌培養基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1搖床上培養22~30h，然后將其接入0.8~1L經滅菌的醋酸菌培養基中，于30~32℃、100~125r·min^-1搖床上培養22~30h，制成菌種種子液備用，此時菌液的活菌數≥10⁹ CFU· mL^-1；

（4）混合菌的組合：按重量比，取上述培養至活菌濃度≥10⁹ CFU·mL^-1的納豆芽孢桿菌14~16份、乳酸桿菌25~32份、釀酒酵母25~30份、產朊假絲酵母13~15份和醋化醋桿菌13~17份，放入經滅菌的25 L桶中混合，備用；

（5）半固體微生物制劑的制備：在50kg的單向透氣發酵袋中加入重量為20~30 kg、經100℃滅菌15min后冷卻備用的固體發酵培養基，將步驟（4）所得混合菌種4~6L及無菌純水5~8L加入固體培養基，攪拌均勻，于30~35℃恒溫培養室中培養80~120h，待發酵物菌含量≥10⁹ CFU·g^-1、水分含量30~35%時取出，即得水產養殖用半固體微生態制劑。