[發明專利]一種高純度神經節苷脂GM1及其制備方法

在審

• 申請號: 201711030425.7
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN109721632A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 鄒麗紅;呂園園;馬明輝;張忠陽;龐德才;周成芳;梁鑫淼;郭志謀;豐加濤
• 申請（專利權）人: 齊魯制藥有限公司
• 主分類號: C07H15/10
• 分類號: C07H15/10;C07H1/08;B01D15/08
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本發明屬生物醫藥技術領域，具體涉及一種高純度神經節苷脂GM1單組份(GM1A、GM1B)、混合組分及其制備方法。本發明提出使用的分離純化方法，采用新的流動相，神經節苷脂GM1及其主要組分得到較好分離，有效解決了分離度不足、雜質多、難分離的問題，且周期時間短，載樣量高，易于實現工業化規模生產。

技術領域

本發明屬生物醫藥技術領域，具體涉及一種高純度神經節苷脂GM1單組份、混合組分、及其制備方法。

背景技術

神經節苷脂(gangliosides)是最復雜的鞘糖脂，廣泛分布于脊椎動物的細胞膜上,在中樞神經系統中含量最高。它由帶唾液酸的寡糖鏈和神經酰胺構成,根據唾液酸和寡糖的糖基數目及唾液酸連接位點的不同,可將神經節苷脂進行分類。其中含量較高的神經節苷脂為GM1、GDla、GDlb、GD3及GTlb。

GM1通過對Na⁺，K⁺-ATP酶活性的“補償”而發揮作用，在Na⁺，K⁺-ATP酶保持膜穩定和興奮性方面起著重要的作用，對細胞正常功能非常重要。GM1的功能大致可歸納為以下幾種：1.促進神經細胞及大腦組織的正常發育,防治腦癱等疾病；2.修復損傷神經及大腦組織,防治腦中風；3.增強記憶功能；4.延緩神經細胞的衰老,防治帕金森、老年癡呆等疾病。其作用備受醫藥領域關注。國內現有的單唾液酸四己糖神經節苷脂(英文名簡稱GM1)制劑主要有：博司捷、申捷、仁澳、賽典、澳苷、腦力鍵等。

目前柱色譜用于制備分離和純化GM1是非常有效的方法。潘穎等人采用離心液相色譜法，甲醇/氯仿/水淋洗的方式進行神經節苷脂的純化，此方法耗時較長，一次純化需要10h，溶劑消耗大，純度也不高，可重復性較差【潘穎etal,Chinese Biochemical Journal，Vol.10,No.4,Aug.,1994】；郭勍等人采用低壓硅膠柱色譜法，甲醇/氯仿/水洗脫的方式進行神經節苷脂的純化，此方法需要進行兩次柱分離，比較復雜且只適合毫克級純品的制備，不適合放大生產【郭勍，etal,Chinese Journal of Chromatography，Vol.10,No.3,1992】；黃如斌等人利用離心液相層析和凝膠層析相結合的方法,從豬腦中提取高純度神經節苷脂，此方法步驟繁瑣，溶劑用量大，周期較長，不適合大量制備，【黃如斌，etal,Prog.Bioehem.Biophys,Vol.21,No.5,1994】；專利CN103524572B公開的純化步驟為脫鹽、硅膠層析、反相層析、濃縮、丙酮重結晶、凍干可以得到高純度的GM1，但純化過程繁瑣，回收率低，時間長，不適合大批量生產；專利CN1353112A公開的純化步驟為離子交換柱層析和反相柱層析，同樣存在操作繁瑣，生產周期長的問題。以上方法在GM1的純度和產率、以及涉及到費用、效率和應用于工業規模的有效性上，存在缺陷。

發明內容

本發明第一方面提供一種高純度神經節苷脂GM1，其特征在于，含有GM1A、GM1B中的一種或兩種；其中所述高純度是指GM1A、GM1B的HPLC總含量在95％以上，優選96％以上、97％以上、或者98％以上，更優選99％以上；所述GM1A和GM1B分別具有如下化學結構：

在本發明的一個實施例中，本發明第一方面所述高純度GM1，其特征在于，GM1為GM1A與GM1B的混合物；優選地，GM1A與GM1B摩爾比為1：0.8～1.2，更優選1：0.9～1.1。

本發明第二方面提供一種制備本發明第一方面所述高純度神經節苷脂GM1的方法，該方法包括一下步驟：