[發明專利]一種抑制外顯子剪切抑制子功能的反義寡核苷酸的篩選方法有效
| 申請號： | 201711020669.7 | 申請日： | 2017-10-26 |
| 公開（公告）號： | CN108265053B | 公開（公告）日： | 2020-10-13 |
| 發明（設計）人： | 賈榮;郭繼華;車曉軒 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭勁松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 抑制 外顯子 剪切 功能 反義 寡核苷酸 篩選 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種抑制可變剪切調控因子SRSF3外顯子4的外顯子剪切抑制子的反義寡核苷酸的篩選方法，其特征在于，依次包括如下步驟：
1）獲得靶基因的外顯子剪切抑制子和臨近的基因序列；
2）根據序列設計和合成一系列經硫代修飾的反義寡核苷酸；
3）將反義寡核苷酸轉染到HEK 293細胞中，并在24小時后提取總蛋白；用Western雜交法檢測該基因的蛋白表達水平，確定與靶基因外顯子剪切抑制子結合效果最好的反義寡核苷酸；
4）根據步驟3）篩選到的反義寡核苷酸的序列，合成每個堿基被2'-O-Methyl和硫代修飾的反義寡核苷酸，并轉染細胞；用RT-PCR的方法檢測靶基因的外顯子的可變剪切，確定效果，即該反義寡核苷酸能夠高效地抑制外顯子剪切抑制子的功能，促進外顯子保留在mRNA中；
上述篩選方法獲得的反義寡核苷酸序列為：
SR-2 GGTTTCAACAAGCTAGAAAT
SR-4 TTTCAACAAGCTAGAAATGG
SR-6 TCAACAAGCTAGAAATGGT
SR-8 AACAAGCTAGAAATGGTGA
SR-9 ACAAGCTAGAAATGGTGAG。
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