[發(fā)明專利]快速檢測呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711018984.6 | 申請日： | 2017-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN108251556A | 公開（公告）日： | 2018-07-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉和錄;竇宇紅;杜紀(jì)坤;朱惠君;李玉霞;劉瓊;馬彩鳳 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳市寶安區(qū)沙井人民醫(yī)院;劉和錄 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 于鵬 |
| 地址： | 518000 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 人腺病毒 血清型 快速檢測 靈敏度 呼吸道 呼吸道感染 報告結(jié)果 試劑檢測 樣品處理 診斷 檢測 治療 | ||
本發(fā)明提供了一種快速檢測呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法，本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明同時檢測B、C、E三種人腺病毒DNA，其中B種人腺病毒包括3、7、16、21、50、66、11、14、34、35、55共11個血清型，C種人腺病毒包括1,2,5,6,57共5個血清型，E種人腺病毒包括4型1個血清型。試劑檢測下限低至2Copies/PCR，定量線性范圍：102～108Copies/ml,靈敏度100.0％(270/270),特異性99.8％(2881/2888)；符合率99.8％(3151/3158)；從樣品處理到報告結(jié)果≤1.2小時；本發(fā)明簡便、快速、靈敏度高、特異性好、成本低，特別適用于致呼吸道感染的B、C、E種人腺病毒精準(zhǔn)診斷，為早期精準(zhǔn)治療贏得時間。
【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及一種呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法，尤其涉及一種快速檢測呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法。
【背景技術(shù)】
腺病毒流行廣泛，傳播快，近年來在多個國家和地區(qū)時有爆發(fā)和流行，嚴(yán)重威脅到社會公共衛(wèi)生安全。人腺病毒(Human mastadenoviruses,HAdV)可以感染多種粘膜組織，如胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道及眼角結(jié)膜等，導(dǎo)致自限性的粘膜感染甚至嚴(yán)重的致死性感染(Robinson,2011；2013a；Lenaerts,2008)。腺病毒感染還和肥胖癥相關(guān)(Arnold,2010；Atkinson,2005；Dhurandhar,2000；董瑞,2013)。各個年齡段人群均能被腺病毒感染，其中易感人群多為嬰幼兒和免疫功能受損的患者(如骨髓移植、人類免疫缺陷病毒感染和先天性免疫缺陷綜合癥)，常可引起嚴(yán)重甚至致死性感染(Stercz,2012)；軍隊中腺病毒是致發(fā)熱性呼吸道疾病的重要病原體。HAdV暴發(fā)感染多發(fā)生在幼兒園、新兵營等封閉或擁擠的場所，大規(guī)模流行中其所致的病死率較高，甚至未經(jīng)治療的重癥HAdV肺炎或彌散性疾病的死亡率可能超過50％。近年來，越來越多新的HAdV型別被發(fā)現(xiàn)，目前HAdV已有68個基因組型別。其中人B組腺病毒是致急性呼吸道感染(ARI)的重要病原體，傳染性強，常導(dǎo)致爆發(fā)流行，在國內(nèi)外多有報道，國內(nèi)流行毒株主要型別為3型和7型，近年人14型和新出現(xiàn)的55型有多次爆發(fā)流行報道，其高致病力引起人們更多關(guān)注。
腺病毒的宿主非常廣，包括哺乳動物豬、犬、牛、馬、蝙蝠和猴、樹鼩等，禽類雞、鴨等，及冷血動物青蛙、蛇等，并在鱘魚中也有發(fā)現(xiàn)。根據(jù)國際病毒分類委員會2014的報告，腺病毒科包括哺乳動物腺病毒(Mastadenovirus)、禽類腺病毒(Aviadenovirus)、感染兩棲類的Siadenovirus、感染爬行類的Atadenovirus和感染魚類的Ichtadenovirus五個屬，其中哺乳動物腺病毒屬目前發(fā)現(xiàn)有25個種，包括人腺病毒7個種(species A-G)。根據(jù)文獻(xiàn)報道和GenBank數(shù)據(jù)顯示已經(jīng)有7種68個腺病毒型別(表1)。
表1人腺病毒的分類a
目前上市的商品試劑和/或公布的檢測方法(CN 101107366 A、CN 103725800 A、CN 103993102 A、CN 104131006 A等)大部分是檢測全部腺病毒的篩查試劑或方法。中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所公布(CN 105586439 A)的檢測試劑雖可檢測B、E種人腺病毒，但缺少C種腺病毒，且不是熒光定量的方法。這些試劑或方法均不能精準(zhǔn)檢測致呼吸道感染的B、C、E種人腺病毒，可能造成漏診或誤診。
【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明目的在于解決基于以上原因，在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)日益發(fā)展的當(dāng)下，現(xiàn)有發(fā)明或試劑已無法滿足需求，發(fā)明新的能實現(xiàn)精準(zhǔn)診斷的方法或試劑迫在眉前的不足而提供的一種新型快速檢測呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種快速檢測呼吸道B、C、E種人腺病毒DNA的方法，包括如下步驟：
(1)臨床呼吸道樣本采集和選取
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