[發明專利]一種松露和三七為原料的菌質及其制備方法

在審

• 申請號: 201711018598.7
• 申請日: 2017-10-26
• 公開（公告）號: CN107801987A
• 公開（公告）日: 2018-03-16
• 發明（設計）人: 郭景龍
• 申請（專利權）人: 郭景龍
• 主分類號: A23L33/00
• 分類號: A23L33/00;A23L31/00;A61K36/258;A61P39/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥技術或保健食品等技術領域，具體涉及一種松露和三七為原料的菌質及其制備方法。

背景技術

三七又名田七，明代著名的藥學家李時珍稱其為“金不換”，揚名中外的中成藥“云南白藥”和“片仔癀”，即以三七為主要原料制成。三七主要活性成分為三七總皂苷(PNS)，尤其是稀有皂苷Rd在治療心腦血管疾病、抗腫瘤方面表現出較好的藥理活性；三七皂苷Rg1是三七的重要活性成分之一，具有抗疲勞、耐缺氧和增強學習記憶功能作用；Rg1還可減少血清中的皮質酮濃度，通過促進BDNF、p-ERK、等一系列促存活蛋白，增加動物神經元生成來產生抗抑郁作用，放松心情對預防心血管病有著重大意義；

松露，別稱塊菌(truffle)，俗稱豬拱菌，是一類與橡樹、松樹、櫟樹等共生的外生菌根菌；法國的松露多產于橡樹根部，而中國的松露產于松樹根部，云南的松露以高黎貢山為最上品，個小、丑、但風味極濃郁，富含a-雄烷醇(催情成分)和二甲硫基甲烷(塊菌特殊風味成分)。a-雄烷醇是松露的活性成分之一，是一種甾體化合物，其化學結構與人體內性激素的化學結構相似，未閹的公豬唾液、睪丸、肝中均含有該化合物，在人的血漿、腋汗及尿液中也有發現；α-雄烷醇具有催情作用，已有企業將其開發成為一種商品——費洛蒙(pheromone)，價值不菲；最近研究表明，a-雄烷醇還具有激發腦細胞活力、調理內分泌、抗疲勞、抗抑郁等作用。

發酵中藥的應用在我國具有悠久的歷史，是傳統中藥加工炮制的重要方法之一，發酵中藥作為一種炮制加工工藝，不但改變了煎、煮、熬、煉、蒸、浸的傳統工藝，而且使藥效提高藥性發生改變產生新化合物并降低藥物不良作用。例如：六神曲、淡豆豉、半夏曲等傳統中藥均由天然微生物發酵而成。傳統的中藥發酵采用天然微生物發酵，菌種不純，代謝理論、藥效成分理念模糊不清，生產可控性差。

發明內容

基于上述原因，申請人經過多年的研究，以新鮮三七作為主要發酵基質，以松露菌液作為菌種，采用真菌雙向發酵技術進行發酵，得到一種新的藥性菌質制備方法，該方法旨在增加兩者的生物活性成分的含量及增強藥效，尤其是能夠增強其抗疲勞功效。

本發明通過下述技術方案實現的。

一種發酵菌質，發酵菌質由下述原料制備而成：三七和松露。

所述的發酵菌質的制備方法包括松露菌液的制備方法和雙向發酵方法，其中雙向發酵方法包括：固態雙向發酵方法或液態雙向發酵方法。

其中松露菌液的制備方法為：

A、將采集的新鮮松露子囊果，用水充分清洗后25KHz超聲波處理5min，再用無菌水和無菌研缽適度研碎得到研磨液；

B、將研磨液涂布于SLF培養基平板，在23-28℃恒溫培養，對長出的菌落于SLF培養基平板劃線純化分離，重復上述操作直至得到單菌落為止；所述SLF培養基成分為：葡萄糖30g/L、蛋白胨10g/L、硫酸銨1g/L、瓊脂20g/L、鮮三七浸出汁1L；

C、將分離到的單菌落分別接入發酵培養基，在23-28℃、150rpm振蕩培養6-10d，采用高效液相色譜分析的方法檢測發酵產物，產a-雄烷醇能力最強的菌株即為篩選的松露菌，將其移至PDA斜面上培養后，于4℃保存；所述發酵培養基成分為：麥芽糖30g/L、蔗糖20g/L、蛋白胨10g/L、硫酸鎂1g/L、磷酸二氫鉀2g/L、硫酸銨1g/L、鮮三七浸出汁1L，121℃滅菌20min。

D、將松露菌斜面菌種接種到菌種富集培養基，在23-28℃、150rpm振蕩培養24h，得到松露菌液；所述的菌種富集培養基成份為：麥芽糖30g/L、蔗糖20g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、硫酸鎂1g/L、磷酸二氫鉀2g/L、硫酸銨1g/L、氯化鈣1g/L、維生素B₁ 0.01g/L，121℃滅菌20min；

其中固態雙向發酵的制備方法為：

A、將新鮮三七加入營養液和純凈水勻漿使其含水量為總重量的60-70％，于121℃滅菌20min得到三七固態培養基；

B、將松露菌液按照10ml/100g接種到三七固態培養基中，攪拌混合均勻使料層厚度為3-5cm，放置于23-28℃的培養箱中發酵，至菌絲長滿培養基時發酵結束，將固態發酵產物干燥粉碎，得到發酵菌質。

其中液態雙向發酵的制備方法為：

A、將新鮮三七與純凈水按質量比1∶5-10混勻并打漿，在60℃逆流提取1h，取濾液加入營養液并混勻，于121℃滅菌20min，得到三七液態培養基；