[發明專利]用于快速鑒定豬的紅黑毛色基因的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201711017139.7
• 申請日: 2017-10-26
• 公開（公告）號: CN107586857B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 藍靜;趙久剛;陳磊;陳四清;張廷煥;王可甜;郭宗義;謝佳嫦;曾莉
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院;重慶市生豬產業技術研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11;G16B20/20
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明提供了一種用于快速鑒定豬的紅黑毛色基因的核酸、試劑盒及方法，其核酸包括紅毛特異性引物、黑毛特異性引物和下游通用引物，其中，所述紅毛特異性引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述黑毛特異性引物的序列如SEQ ID No.2所示，所述下游通用引物的序列如SEQ ID No.3所示。本發明提供的方法可用于鑒別杜洛克和以黑為主要被毛顏色的如太湖豬、盆周山地豬、萊蕪豬雜交后代的毛色，從分子水平上對雜交后代進行早期篩選，從而快速獲得可穩定遺傳的黑毛色豬種的檢測結果，該方法快速、簡單易操作，成本較低，可用于大規模檢測及育種實踐。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于快速鑒定豬的紅黑毛色基因的核酸、試劑盒及方法。

背景技術

在豬的雜交育種中，毛色作為一個很重要的表型性狀通常將其作為一個品種的標志性特征，毛色性狀能否穩定遺傳是一個品種是否成功培育的標志。另一方面，毛的顏色會影響消費者對該產品的認可度，直接影響其經濟效益。因此，對毛色進行快速鑒定、使培育品種的毛色快速純合，可加快選育進展，提高選育效率，節約選育成本。被毛黑色的中國地方豬如太湖豬、盆周山地豬等，以高繁殖性能及較好的肉品質聞名，是世界公認的寶貴豬種遺傳資源，通常在進行品種培育的時候會被作為母本。而被毛紅色的杜洛克豬種因其產肉性能較突出，在品種培育中常作為父本。當以太湖豬、盆周山地豬、萊蕪豬為母本、杜洛克為父本培育新品種系的時候，其雜交后代會出現毛色不整齊，可出現黑色、紅色、紅白條紋、紅黑條紋等多種顏色，這種毛色性狀分離的現象，嚴重影響新培育品種的一致性和整齊度。但傳統的育種方法是通過一代代剔除紅毛色和花紋毛色后代，這需要耗費育種工作者大量時間，浪費許多的經濟成本和時間成本。因此，快速對兩種毛色進行鑒定，并剔除不需要的毛色在育種實踐中尤為重要。

豬的毛色遺傳機理較復雜，涉及到一系列色素沉積相關基因和信號通路，任何一個或幾個基因位點的突變都會引起毛色的改變。黑素皮質素受體1(melanocortin1-receptor，MC1R)基因是控制動物黑色素合成的重要基因，它的正常表達可使黑色素沉積，呈現真黑色，而該基因的突變會影響真黑色素的生成和沉積，從而引起毛色呈現其他顏色。研究報道杜洛克的紅毛色是由于MC1R基因其中一個或幾個位點突變引起的。我們的研究發現杜洛克的紅毛色對太湖豬、盆周山地豬、萊蕪豬的黑毛色為隱性，經統計分析，基本符合經典的孟德爾遺傳定律。

因目前針對MC1R的紅毛色突變位點的確切的功能證據還沒有，文獻報道，在杜洛克與梅山豬(太湖豬的一個類群)之間共有7個位點不同(SHI Kerong等2004，Science inChina Ser.C Life Sciences，Vol.47No.3 287-292)，而Dun等(J GenetGenomics.2007Sep；34(9):777-782.)認為668G--C,1318C--T,and 1554G--A可能可以用以區別長白、大白豬與杜洛克豬的毛色。本發明的發明人根據突變氨基酸的功能結構預測認為該基因mRNA序列第727位位點可能是引起紅黑毛色表型差異的關鍵位點，對毛色基因進行檢測的方法主要是采用PCR-SSCP或PCR-RFLP的方法進行，但由于該位點沒有限制性內切酶位點，且臨近的729位還有一個突變位點，會影響該位點的基因分型，導致結果不準確。此外，這些方法還存在步驟復雜、效率低、成本高、對人員要求高等缺點，不適用于大規模檢測并應用于育種實踐。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于快速鑒定豬的紅黑毛色基因的核酸、試劑盒及方法，該方法可用于鑒別杜洛克和以黑毛色為主的太湖豬、盆周山地豬、萊蕪豬雜交后代的毛色，從分子水平上對雜交后代進行早期篩選，從而快速獲得可穩定遺傳的黑色豬種的檢測結果，該方法快速、簡單易操作，成本較低，可用于大規模檢測及育種實踐。

為實現上述目的，本發明采用以下的技術方案為：