[發(fā)明專(zhuān)利]一種牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711017069.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107683771A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李秀麗;戢小梅;陳法志;陳鎮(zhèn);陳志偉;戴志剛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院林業(yè)果樹(shù)科學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00;A01C1/08
• 代理公司: 北京精金石專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙)11470
• 代理人: 強(qiáng)紅剛

1.一種牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)選取花后50～500d的牡丹種子；

(2)將牡丹種子用流水沖洗干凈后，加入殺菌劑溶液中浸泡5～150min，蒸餾水沖洗，再加入400～600mg·L^-1的GA浸泡30～50h，收集下沉的種子并用蒸餾水沖洗干凈后置于無(wú)菌環(huán)境下的無(wú)菌三角瓶中；

(3)將種子用75％乙醇消毒1～3min，2％次氯酸鈉溶液消毒10～15min，消毒期間不停的搖動(dòng)三角瓶，無(wú)菌水清洗2～10次；

(4)手拿種子，種臍至于上方，用滅菌的修枝剪沿中間部位從下至上剪開(kāi)種子，無(wú)菌鑷子取出靠近種臍的胚，直接接入備好的培養(yǎng)基中，所述的培養(yǎng)基為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+0.01～0.03mg·L^-1NAA+1～2mg·L^-16-BA，所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1/2MS或MS；培養(yǎng)條件為：溫度25±1℃，光照10～12h/d。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(1)選取花后90～110d的當(dāng)年生牡丹種子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的殺菌劑溶液為800倍的多菌靈。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(2)中GA濃度為500mg·L^-1，浸泡時(shí)間為46～48h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(3)中75％乙醇消毒時(shí)間為1min，2％次氯酸鈉溶液消毒時(shí)間為10min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)中所述的修枝剪的滅菌方式為：紫外線(xiàn)照射10～60min，使用前用75％酒精擦拭并用酒精燈滅菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)中所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1/2MS，NAA濃度為0.01mg·L^-1，6-BA濃度為2mg·L^-1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)中光照時(shí)間為12h。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述牡丹胚高效無(wú)菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的牡丹種子選自耐濕熱的‘鳳丹’種子。