[發明專利]一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711016446.3
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN108330179A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 杜予和
• 申請（專利權）人: 廣州和康醫療技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

1.一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括有至少一對如下序列的引物：

2.如權利要求1所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括特異探針，所述的特異探針序列如下：

3.如權利要求1所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括報告探針，所述的報告探針序列如下：

4.一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：首先進行PCR反應，實現擴增；再進行多重OLA反應，標記和連接；然后進行雜交反應，最后進行基因型的分析。

5.如權利要求4所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，PCR反應體系如下：2x qiagen Hotstar MM 5ul,primer mix 1ul，DNA樣本2ul,滅菌水2ul；PCR反應條件為95℃、15min，進行30個循環的94℃,30秒，60℃,30秒，72℃,30秒；72℃、7分鐘，4℃維持。

6.如權利要求4所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，多重OLA反應如下：配制2xOLA master mix，將OLA master mix與PCR反應產物混合，混勻后進行連接反應。

7.如權利要求6所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，配制2xOLA master mix包括有：10x Taq Ligase buffer 2ul,40000U/ml的Taq DNA Ligase0.25ul，野生型探針mix 1ul，突變型探針mix 2ul，去離子水4.75ul。

8.如權利要求6所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，連接反應條件如下：96℃2min,30個循環的94℃15s,37℃1min；4℃維持。

9.如權利要求4所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，雜交反應的洗滌過程如下：選擇相應的報告探針的磁珠，重懸，然后將每種磁珠混合，稀釋最多至100u顆/ul，用2X Tm hybridization buffer，混合后加入磁珠混合物至每孔中，添加1-5ul OLA reaction和25ul dH₂O至每個孔，進行PCR反應：96℃90s,37℃30min，吸走上清，用1x Tm hybridization buffer重懸磁珠，吸磁30-60s，再次吸走上清，重復用1x Tmhybridization buffer重懸磁珠，吸磁30-60s，第三次吸走上清，用1x Tm hybridizationbuffer重懸磁珠，在37℃溫育15min，加入50ul反應產物至LUMINEX中分析。

10.如權利要求4所述的一種TNF-α拮抗劑應答療效SNP位點檢測的方法，其特征在于，雜交反應的不洗滌程序過程如下：1、選擇磁珠，并重懸；2、將每種磁珠混合，并稀釋至100u顆/ul，用2X Tm hybridization buffer，振蕩混合；3、加入磁珠混合物至每孔中；4、添加樣品至每孔中；5、進行PCR反應：96℃90s，37℃30min；6、準備6ug/ml SAPE在1xhybridization buffer；7、添加100ul SAPE mix，混勻；8、37℃溫育15min；9、加入100ul至37℃的luminex中分析。