[發明專利]用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201711015221.6
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107574233A
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 張戈;滕祥云;黃少亞
• 申請（專利權）人: 長沙三濟生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的引物組，其特征在于，所述引物組包括擴增引物對、探針及PNA，其中：

所述擴增引物對序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探針序列為：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述PNA序列為：

NH₂-5’-GATGTTGCTTCTCTTAATTCC-3’-COOH。

2.一種用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括兩套PCR反應體系，第一套PCR反應體系包括針對EGFR基因19外顯子野生型和缺失突變檢測設計的擴增引物對及探針，其中：

所述擴增引物對序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探針序列為：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述第一套PCR反應體系還包括2×PCRbuffer、DNA模板和去離子水；

第二套PCR反應體系包括針對EGFR基因19外顯子缺失突變檢測設計的擴增引物對、探針及PNA，其中：

所述擴增引物對序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探針序列為：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述PNA序列為：

NH₂-5’-GATGTTGCTTCTCTTAATTCC-3’-COOH；

所述第二套PCR反應體系還包括2×PCRbuffer、DNA模板和去離子水。

3.根據權利要求2所述的用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述第一套PCR反應體系的成分終濃度為：1×PCR buffer、0.2μM正向引物、0.2μM反向引物、0.2μM探針和1μL DNA模板。

4.根據權利要求3所述的用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述第二套PCR反應體系的成分終濃度為：1×PCR buffer、0.2μM正向引物、0.2μM反向引物、0.2μM探針、2μM PNA和1μL DNA模板。

5.根據權利要求2至4任一項所述的用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品、陰性對照品和空白對照品。

6.根據權利要求5所述的用于檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為EGFR基因突變型質粒，所述陰性對照品為EGFR基因野生型質粒，所述空白對照品為無核酸酶水。

7.一種檢測EGFR基因19外顯子缺失突變的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：取待檢測樣本抽提的DNA，作為PCR模板；

步驟二：提供如權利要求6所述的試劑盒，取出適量第一套PCR反應體系和第二套PCR反應體系，將適量PCR模板分別與第一套PCR反應體系和第二套PCR反應體系分別混勻；

步驟三：兩套PCR反應體系均進行PCR擴增反應：95℃預變性5min；45cycles，95℃15sec，58℃30sec；

步驟四：PCR結果判定：在所述試劑盒的陽性對照品、陰性對照器和空白對照品符合規定的情況下，根據熒光擴增曲線得到兩套PCR反應體系的CT值及其差值定性判斷EGFR基因19外顯子缺失突變。