[發明專利]一種青霉素酰化酶固定化載體及其制備方法

在審

• 申請號: 201711015061.5
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107916259A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 陳振斌;王旭東;李軻;張霞云;段成龍;賈偉煒
• 申請（專利權）人: 蘭州理工大學
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;C12N11/14
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種青霉素酰化酶固定化載體，其特征在于，載體通過戊二醛對其表面進行修飾，戊二醛通過醛基與TiO₂表面的羥基結合在一起，以另一端的醛基為靶點固定PGA；固定化PGA活力范圍為11000-14000U/g、對應游離酶負載量范圍13000-15000U/g、酶活回收率范圍80-90％、重復使用12次后，其酶活保留率為60％。

2.根據權利要求1所述的青霉素酰化酶固定化載體，其特征在于，各個反應物質量比為TiO₂：戊二醛：乙醇＝10：13:177；固定化青霉素酰化酶對應游離酶負載量為14956U、游離酶活力16939U/g、酶活回收率88％。

3.一種權利要求1所述青霉素酰化酶固定化載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、改性TiO₂載體的制備；

1)將TiO₂在120℃活化24小時；

2)固定化載體的合成：以各個反應物質量比為TiO₂：戊二醛：乙醇＝10：13:177；稱取戊二醛與無水乙醇的混合液，加入活化的TiO₂，恒溫水浴機械攪拌24h；產物沖洗干凈，常溫干燥至恒重，即得到酶固定化載體；

步驟2、固定化PGA

向上述合成的載體中，加入20倍載體質量的1％的游離PGA溶液，密封，超聲分散均勻后，在25℃條件下避光震蕩24小時；分離游離酶殘液，固定化PGA用磷酸鹽緩沖液沖洗，直到洗滌液中加入青霉素G，并用PDAB顯色3min后，測的溶液的吸光度小于0.003為止；放入35℃真空烘箱干燥至恒重，得固定化PGA。