[發明專利]一種黃芪破壁飲片活性成分的血藥濃度定量分析方法

在審

• 申請號: 201711010087.0
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107907619A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 楊澤銳;陳莎;成金樂;鄧雯;鄧銀愛;徐吉銀;王義娜
• 申請（專利權）人: 中山市中智藥業集團有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及黃芪破壁飲片活性成分檢測的技術領域，特別涉及一種黃芪破壁飲片活性成分的血藥濃度定量分析方法。

背景技術

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。黃芪味甘，性微溫，歸肺、脾經，具有補氣升陽、益衛固表、托毒生肌和利水退腫等功效；臨床用于脾肺氣虛、中氣下陷、表虛自汗、氣血不足、癰疽難潰、久潰不斂、氣虛血滯、浮腫尿少、半身不遂和痹痛麻木等癥。

黃芪所含化學成分主要分為三類，即黃芪皂苷、黃酮類成分以及黃芪多糖，此外還有氨基酸、微量元素等，其中黃芪皂苷以及黃酮類成分是黃芪中最為重要的有效成分。

中藥破壁飲片是將符合法定標準要求并具有細胞結構的植物類中藥飲片，經現代粉碎技術加工至D90﹤45μm(300目以上)的粉體，通過誘發自身物質的粘合性，制成30～100目的原飲片全成分的均勻干燥顆粒狀飲片。相比傳統飲片，中藥破壁飲片具有質量均一，藥物利用率高、穩定性好及應用方便快捷的優勢。但是由于破壁飲片粉體粒徑小，其有效成分的體外溶出速度和溶出量以及體內生物利用度也將高于傳統飲片，活性成分的藥代動力學PK參數和行為和傳統飲片相比也將存在差異。

目前，現有技術中涉及到的黃芪活性成分的藥代動力學研究，多集中在黃芪單個成分藥代動力學分析方法方面；若要全面同時反映黃芪多種主要活性成分的體內藥動學規律，進行黃芪破壁飲片多種活性成分在體內的吸收特征的藥代動力學研究，必須要實現黃芪破壁飲片多種活性成分的同時檢測，目前關于同時對多種活性成分檢測的方法鮮有報道。

因此，開發一種靈敏度高、快捷方便的黃芪破壁飲片多種活性成分檢測方法具有重要的研究意義和應用價值。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的檢測方法不能同時檢測黃芪破壁飲片多種活性成分的含量的缺陷，提供一種黃芪破壁飲片活性成分的血藥濃度定量分析方法。本發明提供的定量分析方法可同時實現五種活性成分血藥濃度定量分析，檢出限在0.30～0.33ng/ml范圍內，靈敏度高，方便快捷。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種黃芪破壁飲片活性成分的血藥濃度定量分析方法，所述方法包括如下步驟：

S1：制備線性梯度溶液、質控品溶液和內標溶液，建立標準曲線；

S2：血漿樣品處理；

S3：采用HPLC-MS進行測定；其中，流動相A為甲酸水溶液，流動相B為甲酸乙腈溶液；梯度洗脫條件為：0.0～5.0min：A流動相：85％→50％；5.0～9.0min：A流動相：50％→30％；9.0～9.5min：A流動相：30％→10％；9.5～12.5min：A流動相：10％；12.5～13min：A流動相：10％→85％。

本發明通過對流動相和梯度洗脫參數進行多次試驗發現，采用上述流動相組成和梯度洗脫條件時，可同時實現多種黃芪破壁飲片活性成分的血藥濃度定量檢測，靈敏度高，操作快速方便。

優選地，所述活性成分為黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮或芒柄花素中的一種或數種。

優選地，所述流動相A和流動相B中甲酸的體積分數為0.1％。

優選地，所述線性梯度溶液中黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素的濃度依次為0.91～468.00ng/mL、0.98～504.00ng/mL、0.94～482.90ng/mL、0.95～489.00ng/mL和0.97～499.80ng/mL范圍內的至少5個不同濃度。

更為優選地，所述線性梯度溶液中黃芪甲苷的濃度為468.00ng/mL、234.00ng/mL、117.00ng/mL、58.50ng/mL、29.25ng/mL、14.63ng/mL、7.31ng/mL、3.66ng/mL、1.82ng/mL和0.91ng/mL。

更為優選地，所述線性梯度溶液中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的濃度為504.00ng/mL、252.00ng/mL、126.00ng/mL、63.00ng/mL、31.50ng/mL、15.75ng/mL、7.88ng/mL、3.94ng/mL、1.96ng/mL和0.98ng/mL。