[發明專利]前列腺癌特異性外泌體、lncRNA及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711009895.5
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107828779B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 汪付兵;王宇慧;陳浩
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

1.一種非疾病的診斷或治療為目的的前列腺癌外泌體中的長鏈非編碼RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表達量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：1）外泌體RNA的提取；2）外泌體RNA反轉錄合成cDNA；3）長鏈非編碼RNA SAP30L-AS1和SChLAP1的擴增：反轉錄的cDNA為模板分別進行實時熒光定量PCR擴增獲得長鏈非編碼RNA SAP30L-AS1和SChLAP1。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的擴增引物為：

SAP30L-AS1正向引物：5’-TGAATGGGCTCACCTGTTCC-3’

SAP30L-AS1反向引物：5’- AGGTCCGGAAGGGAGACTTT-3’

SChLAP1正向引物：5’- TGGACACAATTTCAAGTCCTCA-3’

SChLAP1反向引物：5’- CATGGTGAAAGTGCCTTATACA-3’。

3.權利要求1檢測前列腺癌外泌體中的長鏈非編碼RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表達量的試劑在制備用于前列腺癌診斷試劑中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述檢測長鏈非編碼RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表達量的試劑為實時熒光定量PCR檢測試劑。

5.一種前列腺癌診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括雙抗體偶聯免疫磁珠和權利要求2所述的實時熒光定量PCR的擴增引物；

所述雙抗體偶聯免疫磁珠的制備包括以下步驟：取磁珠用磷酸鹽緩沖液清洗后，用磷酸鹽緩沖液重懸得到懸液；向懸液中加入EpCAM和PSMA抗體進行孵育；孵育后用磁力架分離磁珠，用磷酸鹽緩沖液進行清洗，分離的磁珠用磷酸鹽緩沖液重懸得到懸浮液備用；用磁力架分離懸浮液得到雙抗體偶聯免疫磁珠。

6.根據權利要求5所述的前列腺癌診斷試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括總外泌體提取試劑、逆轉錄試劑和RT-qPCR試劑。