[發(fā)明專利]一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點(diǎn)基因型的方法及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711009881.3
• 申請(qǐng)日: 2017-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN108004305A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜予和;黃尚春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州和康醫(yī)療技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 袁燕清

一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點(diǎn)基因型的方法及試劑盒,本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，本試劑盒針對(duì)人類基因組DNA中甲氨蝶呤療效及毒副作用風(fēng)險(xiǎn)的3個(gè)SNP位點(diǎn)，設(shè)計(jì)特異性引物和野生型/突變型探針，與帶有特異報(bào)告探針的MagPlex?TAG磁珠進(jìn)行雜交反應(yīng)，通過顯色反應(yīng)在luminex 200儀器上進(jìn)行檢測。通過對(duì)信號(hào)值的讀取判讀各個(gè)SNP位點(diǎn)的堿基型別進(jìn)行判定。本發(fā)明的有益效果在于：針對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者服用甲氨蝶呤療效及毒副作用風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的3個(gè)SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物和探針，可分型檢測3個(gè)SNP位點(diǎn)的型別。本發(fā)明提供的檢測試劑盒可以靈敏、快速低檢測人全血樣本中3個(gè)SNP型別，可為甲氨蝶呤用藥療效及毒副作用風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測提供可靠的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，指導(dǎo)臨床治療選擇。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點(diǎn)基因型的方法及試劑盒，通過同時(shí)檢測甲氨蝶呤療效性及毒副作用風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)的ABCB1基因、MTHFR基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)基因型來評(píng)估甲氨蝶呤在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其他疾病使用中的有效性及毒副作用風(fēng)險(xiǎn)。

背景技術(shù)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一類以關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的系統(tǒng)性自身免疫病，影響世界上0.5％-1.0％的人群，中國發(fā)病率約為0.3％，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑模血管增生，形成血管翳，導(dǎo)致滑膜增厚，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯軟骨并引起骨質(zhì)損害，對(duì)其周圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)畸形而出現(xiàn)功能障礙。

甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療中應(yīng)用最廣泛的改善病情抗風(fēng)濕藥。低劑量MTX治療RA的主要障礙是它的無效性和/或毒性，約30％的RA患者對(duì)MTX治療反應(yīng)不佳，10％-30％的病人因不良反應(yīng)而中止治療。研究發(fā)現(xiàn)ABCB1的C3435T(rs1045642)多態(tài)性、MTHFR基因C677T(rs1801133)和1298C(rs1801131)多態(tài)性對(duì)RA患者使用MTX治療的有效性或毒性反應(yīng)相關(guān)。使用MTX的不良反應(yīng)包括胃腸反應(yīng)、骨髓抑制、肝功能損害、肺肝纖維化、感染等，目前對(duì)這些位點(diǎn)的檢測仍未推廣到RA患者使用MTX治療的檢測中。

ATP結(jié)合盒亞家族B成員1(ATP-binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)，位于人類染色體7q21.1，編碼P-糖蛋白。ABCB1基因C3435T(rs1045642)有TT純和突變型，CT雜合突變型，CC野生基因型。中國漢族人群TT基因型約占32％。研究發(fā)現(xiàn)，RA患者ABCB1的C3435T基因的多態(tài)性和MTX的療效相關(guān)。Takatori等的研究提示攜帶3435TT基因型的患者對(duì)MTX治療無效的風(fēng)險(xiǎn)比3435CC基因型高。ABCB1的C3435T多態(tài)性增加了MTX治療毒性的風(fēng)險(xiǎn)。攜帶至少一個(gè)3435T基因有高的MTX總的毒性風(fēng)險(xiǎn)，特別是肝毒性。