[發明專利]一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201711009881.3
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN108004305A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 杜予和;黃尚春
• 申請（專利權）人: 廣州和康醫療技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 袁燕清

1.一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括有如下序列的引物：

2.如權利要求1所述的一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括特異探針，所述的特異探針序列如下：

3.如權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括報告探針，所述的報告探針序列如下：

4.一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型檢測的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：首先進行PCR反應，實現擴增；再進行多重OLA反應，標記和連接；然后進行雜交反應，最后進行基因型的分析。

5.如權利要求4所述的一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型檢測的方法，其特征在于，PCR反應體系如下：2x qiagen Hotstar MM 5ul,primer mix 1ul，DNA樣本2ul,滅菌水2ul；PCR反應條件為95℃、15min，進行30個循環的94℃,30秒，60℃,30秒，72℃,30秒；72℃、7分鐘，4℃維持。

6.如權利要求4所述的一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型檢測的方法，其特征在于，多重OLA反應如下：配制2xOLA master mix，將OLA master mix與PCR反應產物混合，混勻后進行連接反應。

7.如權利要求6所述的一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型檢測的方法，其特征在于，配制2xOLA master mix包括有：10x Taq Ligase buffer 2ul,40000U/ml的Taq DNALigase 0.25ul，野生型探針mix 1ul，突變型探針mix 2ul，去離子水4.75ul。

8.如權利要求6所述的一種檢測甲氨蝶呤療效的SNP位點基因型檢測的方法，其特征在于，連接反應條件如下：96℃2min,30個循環的94℃15s,37℃1min；4℃維持。