[發明專利]一種用于診斷膀胱癌的聯合標志物及試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201711007984.6
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN109709220B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 許國旺;鄭思佳;趙欣捷;王晴晴;王曉琳
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種用于診斷膀胱癌的聯合標志物，包括甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸。

2.聯合標志物在制備用于診斷受試者中的膀胱癌的試劑盒中的應用，其中所述聯合標志物包括甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸。

3.一種檢測受試者中的膀胱癌的試劑盒，所述試劑盒包括：

（1）標準品：包括甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸，所述標準品分別用于繪制對應的血清代謝物甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸的定性和定量標準曲線；

（2）用于預處理來自受試者的血清樣品的提取液：包含內標1-¹³C-纈氨酸、D4-鵝脫氧膽酸、D3-棕櫚酸的甲醇溶液；

（3）用于洗脫色譜柱的洗脫液。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述用于洗脫色譜柱的洗脫液是用于洗脫SeQuant ZIC-HILIC色譜柱的洗脫液。

5.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述洗脫液包括：

流動相A：包含10 mM 乙酸銨和0. 02%（v/v）乙酸的95%（v/v）乙腈水溶液；

流動相B：包含10 mM 乙酸銨和0. 02%（v/v）乙酸的水溶液。

6.根據權利要求3-5任一所述試劑盒，其特征在于：所述試劑盒使用方法包括下述步驟：

(1) 利用甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸標準品配制混合標準溶液并逐級稀釋，之后加入內標1-¹³C-纈氨酸、D4-鵝脫氧膽酸、D3-棕櫚酸；將溶液上樣到色譜柱，洗脫，質譜檢測記錄所述甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸、鵝去氧膽酸及內標1-¹³C-纈氨酸、D4-鵝脫氧膽酸、D3-棕櫚酸的洗脫峰強度；分別繪制相甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鵝去氧膽酸的定量標準曲線，其對應橫坐標為濃度，縱坐標為代謝物峰與內標峰的相對強度；

(2) 用提取液預處理來自受試者的血清樣品，其中所述提取液為包含內標1-¹³C-纈氨酸、D4-鵝脫氧膽酸、D3-棕櫚酸的甲醇溶液；沉淀血清樣品中的蛋白，將上清液冷凍干燥，然后用乙腈：水=1:1（v/v）復溶，上樣到色譜柱，洗脫，記錄所述血清樣品中的甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸、鵝去氧膽酸及內標的洗脫峰強度；

(3) 根據步驟(1)的定量標準曲線和步驟(2)的洗脫峰強度，計算所述受試者的血清樣品中的甘磷酸膽堿、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸及鵝去氧膽酸的濃度；最后基于二元邏輯回歸方程計算聯合標志物變量。

7.根據權利要求6所述試劑盒，其特征在于：其中分離裝置包括SeQuant ZIC-HILIC色譜柱和超高效液相色譜串聯質譜儀。