[發(fā)明專利]一種檢測(cè)結(jié)直腸癌中蛋白質(zhì)組的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711004909.4
• 申請(qǐng)日: 2017-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN107860922B
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李斌;胡會(huì)芳;何慶瑜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N27/62
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 向玉芳

本發(fā)明涉及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移方面的研究，具體是一種檢測(cè)結(jié)直腸癌中蛋白質(zhì)組的方法。本發(fā)明利用Transwell篩選高侵襲的腸癌細(xì)胞HCT116?I8，并結(jié)合SILAC技術(shù)進(jìn)行定量組學(xué)的蛋白質(zhì)鑒定找到與細(xì)胞侵襲能力相關(guān)的蛋白質(zhì)或通路。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以從整體角度分析高侵襲能力的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平，可以全景式地檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)譜。利用高度侵襲腸癌模型和蛋白組學(xué)篩選侵襲相關(guān)功能蛋白這一技術(shù)發(fā)明能夠高通量、高精度、高分辨率地檢測(cè)在結(jié)直腸癌中不同侵襲能力的細(xì)胞中蛋白質(zhì)組的變化，并可以發(fā)現(xiàn)與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的潛在通路。利用這一技術(shù)可以高效率的探索癌癥等疾病的發(fā)生機(jī)制，并提供可信度較高的藥物作用靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)結(jié)直腸癌中蛋白質(zhì)組的方法。

背景技術(shù)

癌癥的轉(zhuǎn)移過程涉及多種細(xì)胞生物學(xué)行為，如粘附、運(yùn)動(dòng)、增殖、細(xì)胞外基質(zhì)降解等多個(gè)環(huán)節(jié)，是多種分子共同協(xié)調(diào)作用的結(jié)果，而傳統(tǒng)的單因素分析無法反映和闡述癌轉(zhuǎn)移過程中復(fù)雜的病理機(jī)制，定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是對(duì)參與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲的蛋白質(zhì)進(jìn)行研究的有力武器。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以從整體角度分析高侵襲能力的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平,可以全景式地檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)譜，挖掘腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)發(fā)生的早期分子事件,為癌轉(zhuǎn)移的復(fù)雜機(jī)制研究提供了全新思路。Transwell技術(shù)是建立高侵襲能力細(xì)胞模型的重要策略，簡(jiǎn)單說就是用一層鋪有基質(zhì)膠的膜將高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開，在低營(yíng)養(yǎng)液中的細(xì)胞會(huì)有向高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液侵襲的趨勢(shì)，將侵襲到高營(yíng)養(yǎng)液中的細(xì)胞消化下來進(jìn)行下一輪的侵襲篩選。對(duì)單一結(jié)直腸癌細(xì)胞株進(jìn)行多次遷移侵襲篩選，挑選出遷移侵襲能力高的癌細(xì)胞亞系進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究。利用Transwell技術(shù)建立高侵襲能力細(xì)胞模型也得到了較多的應(yīng)用。利用Transwell技術(shù)建立高侵襲能力細(xì)胞模型的應(yīng)用中，多數(shù)篩選到1輪～3輪。然后能提高細(xì)胞的侵襲能力。但并不能將該高侵襲的特性保持長(zhǎng)久^1,2。(1.張凌志；邸菁；王運(yùn)杰；趙昕；張朝東,Transwell小室篩選高侵襲性C6細(xì)胞MMP-2和TIMP-2的表達(dá).腫瘤防治雜志2005,(10),742-745.2.Li,B.；Xu,W.W.；Lam,A.K.Y.；Wang,Y.；Hu,H.F.；Guan,X.Y.；Qin,Y.R.；Saremi,N.；Tsao,S.W.；He,Q.Y.；Cheung,A.L.M.,Significance of PI3K/AKT signaling pathway in metastasis of esophageal squamous cell carcinoma andits potential as a target for anti-metastasis therapy.Oncotarget 2017,8,(24),38755-38766.)

細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(Stable isotope labeling with aminoacids in cell culture，SILAC)是利用含有N¹⁵和C¹³等重鏈同位素標(biāo)記的氨基酸或者含有N¹⁴和C¹²等輕鏈氨基酸對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，之后經(jīng)過質(zhì)譜鑒定換算出蛋白質(zhì)變化比率而對(duì)蛋白質(zhì)變化進(jìn)行定量。利用SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)不同侵襲能力的細(xì)胞進(jìn)行定量標(biāo)記，高通量的鑒定與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)的變化，是發(fā)現(xiàn)新的與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白、探索已知蛋白新功能的有效手段。

在應(yīng)用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)移方面的研究中，尚未有研究團(tuán)隊(duì)結(jié)合Transwell技術(shù)建立高侵襲能力結(jié)直腸癌細(xì)胞模型的方法進(jìn)行研究的先例。

在以往的細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移研究中，多數(shù)研究人員僅僅能夠?qū)⑴c細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的單個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行探索。這種研究方法耗時(shí)較長(zhǎng)且精度較低，不能大規(guī)模的探究細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲中蛋白質(zhì)的種類以及含量的變化。