[發(fā)明專利]一種耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711003977.9
• 申請(qǐng)日: 2017-10-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107557307A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳雪鳳;吳圣進(jìn);王燦琴;吳小建;韋仕巖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京國(guó)坤專利代理事務(wù)所(普通合伙)11491
• 代理人: 黃耀鈞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于菌株篩選技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法。

背景技術(shù)

廣西栽培木耳有500余年歷史，是廣西4大食用菌之一。由于近年黑木耳市場(chǎng)價(jià)格穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)效益明顯，其栽培面積日益擴(kuò)大。目前廣西主栽的黑木耳品種大多數(shù)來(lái)自北方或浙江福建一帶的中低溫型品種。中低溫品種在廣西栽培，遇到暖冬氣候，容易出現(xiàn)爛包，潮次減少，產(chǎn)量和品質(zhì)下降。云耳是廣西特有的黑木耳品種，耳片棕褐色，有光澤，半透明，入口嫩脆爽滑，口感極佳，因質(zhì)量好曾在全國(guó)商品木耳評(píng)比中名列三甲，享譽(yù)海內(nèi)外。盡管云耳在黑木耳品種中屬于中偏高溫型品種，但受高溫氣候影響仍然較大，因此云耳也主要集中在桂西北、或桂北山區(qū)栽培，廣西大部分地區(qū)仍不能栽培。為了更好的推進(jìn)廣西云耳特色資源的開(kāi)發(fā)利用，必須篩選出較耐高溫的云耳菌株，擴(kuò)大栽培區(qū)域。

目前食用菌高溫菌株的篩選技術(shù)方法主要有兩種方式：一是采取菌絲體熱激法，即菌絲體在適宜培養(yǎng)條件下培養(yǎng)一定時(shí)間后，放入高溫條件下進(jìn)行熱刺激1-8h,再取出放在正常溫度25℃下進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)，測(cè)量菌絲的生長(zhǎng)速度，淘汰耐高溫能力差的菌株；二是菌絲體單一溫度耐高溫培養(yǎng)法，將剛接種后的菌絲放置于40℃高溫條件下進(jìn)行培養(yǎng)1-24h，再取出放在正常溫度25℃下進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)，測(cè)量菌絲的生長(zhǎng)速度，淘汰耐高溫能力差的菌株。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題是：一、黑木耳的菌絲體對(duì)高溫有一定的忍耐性，菌絲體受短暫高溫影響后，都可以正常地恢復(fù)生長(zhǎng)。品種對(duì)高溫條件忍受的時(shí)間越長(zhǎng)，程度越大說(shuō)明該品種的耐高溫能力越強(qiáng)。目前菌絲體耐高溫篩選方法中熱處理培養(yǎng)時(shí)間短、高溫條件單一、缺乏菌絲體由低溫到高溫馴化適應(yīng)性、穩(wěn)定性鍛煉，因此篩選出的耐高溫菌株缺乏代表性及穩(wěn)定性。二、食用菌不同生育期，對(duì)高溫的耐受性不盡相同。一個(gè)優(yōu)良的耐高溫品種，不僅菌絲體能耐高溫，子實(shí)體也能耐高溫出菇。目前食用菌高溫品種篩選技術(shù)主要采用菌絲體耐高溫篩選，子實(shí)體耐溫篩選較少，因此篩選出的品種會(huì)出現(xiàn)菌絲體耐高溫，但高溫條件下不能正常出菇的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法，所述耐高溫菌株的室內(nèi)篩選方法包括以下步驟：

步驟一，設(shè)置6個(gè)溫度梯度，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)；活化5d的菌株菌絲圓片接種到PDA綜合培養(yǎng)基中央，分別置于25℃，28℃，31℃，34℃，37℃，40℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d，觀察菌絲生長(zhǎng)情況，測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速率；

步驟二，活化好的菌株菌絲圓片接種到PDA綜合平皿培養(yǎng)基中央，置于40℃培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)3d、5d、7d、9d、11d后，再移出放置于25℃恢復(fù)培養(yǎng)7d，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，觀察菌絲生長(zhǎng)情況，測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度；

步驟三，供試菌株活化5d后，挑取菌落邊緣菌絲塊圓片接種于PDA綜合平皿培養(yǎng)基中央，置于40℃下培養(yǎng)5d，取出在28℃下恢復(fù)培養(yǎng)7d；挑選萌發(fā)生長(zhǎng)較好的菌絲塊再接種于PDA綜合培養(yǎng)基上，放到42℃培養(yǎng)3d，取出在28℃下恢復(fù)培養(yǎng)7d，再挑選萌發(fā)生長(zhǎng)較好的菌絲塊接種于PDA綜合培養(yǎng)基上，置于45℃培養(yǎng)5h后；取出在28℃下培養(yǎng)7d；各個(gè)溫度處理恢復(fù)生長(zhǎng)7d后，觀察菌絲生長(zhǎng)情況，測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度。

步驟四：供試菌株活化培養(yǎng)8d后，制作栽培菌種；栽培菌種滿袋后，將栽培種接入出菇袋培養(yǎng)基中培養(yǎng)50d左右，將出菇袋分別放到25℃、28℃、31℃出菇條件下進(jìn)行出耳，觀察現(xiàn)蕾情況。

進(jìn)一步，所述步驟一中菌絲生長(zhǎng)速率(mm/d)＝菌落半徑(mm)/生長(zhǎng)天數(shù)(d)。

進(jìn)一步，所述耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法篩選的菌株TY041、TY026、TY071、HME2、YE1。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及積極效果為：菌株TY041、TY026、TY071、HME2、YE1、經(jīng)不同溫度下菌絲培養(yǎng)、40℃下高溫培養(yǎng)處理后菌絲恢復(fù)、高溫鍛煉(40℃、42℃、45℃)，菌絲體的生長(zhǎng)速度及菌絲長(zhǎng)勢(shì)均表現(xiàn)相對(duì)較穩(wěn)定。所篩選的菌株經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間40℃高溫培養(yǎng)后恢復(fù)生長(zhǎng)速度比對(duì)照菌株916快10％以上。通過(guò)該技術(shù)方法篩選出的菌株現(xiàn)蕾出菇溫度比對(duì)照菌株916提高了6℃。篩選出菌株不僅菌絲體較耐高溫，而且能在高溫區(qū)28-31℃正常現(xiàn)蕾，獲得相對(duì)耐高溫的種質(zhì)資源材料，為今后選育適合廣西地區(qū)栽培的耐高溫優(yōu)良云耳品種奠定基礎(chǔ)。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的耐高溫云耳菌株的室內(nèi)篩選方法流程圖。