[發(fā)明專利]一種地衣芽孢桿菌與酪酸菌復(fù)合菌劑的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711002881.0
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN107557322A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡紅偉;段明房;麻嘯濤;閆凌鵬;楊京娥;黨亞鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 山西大禹生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/10;C12R1/07
• 代理公司: 太原高欣科創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙)14109
• 代理人: 冷錦超,崔雪花

1.一種地衣芽孢桿菌與酪酸菌復(fù)合菌劑的制備方法，包括菌種的活化及擴配、種子罐培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、菌體離心收集、載體吸附及低溫干燥，其特征在于，所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)包括以下步驟：

a）將地衣芽孢桿菌二級種子液按照重量百分比2~6%的比例接入到發(fā)酵罐中，罐壓控制在0.03MPa~0.05Mpa，通風(fēng)比控制在1:0.5~1:0.8，轉(zhuǎn)速120~180r/min，30~37℃，培養(yǎng)16-20h，之后停止通氣，繼續(xù)攪拌培養(yǎng)1~3h，鏡檢活菌數(shù)；

b）在步驟a）鏡檢活菌數(shù)在1.0×10⁹~3.0×10⁹CFU/ml時，將酪酸菌二級種子液按照重量百分比2~6%的比例接入到發(fā)酵罐中，轉(zhuǎn)速100~120r/min，每隔1h攪拌5分鐘，32~37℃培養(yǎng)26~30h，即得地衣芽孢桿菌與丁酸梭菌混合培養(yǎng)物；

當(dāng)酪酸菌發(fā)酵至13~15h時，開始流加濃度為20~30%的葡萄糖溶液，當(dāng)發(fā)酵至22~24h時，結(jié)束流加；

當(dāng)酪酸菌發(fā)酵至14~16h時，開始流加由蛋白胨0.5%、0.05%的半胱氨酸鹽酸鹽、磷酸氫二鉀0.02%組成的氮源補料培養(yǎng)基，當(dāng)發(fā)酵至20~22h時，結(jié)束流加。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽孢桿菌與酪酸菌復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中用10%的稀鹽酸或5%的氨水自動調(diào)控pH在6.8~7.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽孢桿菌與酪酸菌復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中碳源補充培養(yǎng)基與氮源補充培養(yǎng)基添加比例為1:1，總添加量控制在15-20%，最終發(fā)酵罐裝料量控制在80~85%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽孢桿菌與酪酸菌復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)，在發(fā)酵結(jié)束前3~5h，將溫度逐步提高至40~45℃，鏡檢活菌數(shù)在1.0×10⁹~5.0×10⁹CFU/ml，染色觀察芽孢率在90%以上時，結(jié)束發(fā)酵。