[發明專利]一種檢測JAK2V617F基因突變的引物組合物及其試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 201711002034.4
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN107841536A
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 關明;曹國君;許笑;唐宜桂;張心菊;康志華;鄧萱;馬瑋哲;王儼;馬艷春
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種檢測JAK2V617F基因突變的的引物組合物，其特征在于，包括SEQ ID NO：2～SEQ ID NO：6所示序列的引物。

2.根據權利要求1所述的一種檢測JAK2V617F基因突變的的引物組合物，其特征在于，還包括如SEQ ID NO：7所示序列的PNA探針。

3.根據權利要求1所述的一種檢測JAK2V617F基因突變的的引物組合物，其特征在于，所述SEQ ID NO：4～SEQ ID NO：5所示序列的引物中的至少一個的5'端進行鎖核酸修飾。

4.一種含有權利要求1～3中任一項所述的引物組合物的檢測JAK2V617F基因突變的試劑盒。

5.根據權利要求4所述的檢測JAK2V617F基因突變的試劑盒，其特征在于，還包括反應工作液、Bst DNA聚合酶、去離子水、DNA模板。

6.根據權利要求5所述的檢測JAK2V617F基因突變的試劑盒，其特征在于，還包括顯色劑。

7.根據權利要求6所述的檢測JAK2V617F基因突變的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括反應工作液17μL，SEQ ID NO：2～SEQ ID NO：6所示序列中的每一引物各0.5μL，SEQ ID NO：7所示序列的PNA探針1μL，Bst DNA聚合酶1μL，中性紅染料1μL，去離子水0.5μL，DNA模板2μL。

8.根據權利要求7所述的檢測JAK2V617F基因突變的試劑盒，其特征在于，所述SEQ ID NO：2～SEQ ID NO：3所示序列中的每一引物的終濃度均為0.2μmol/L；

SEQ ID NO：4～SEQ ID NO：5所示序列中的每一引物的終濃度均為1.6μmol/L；

SEQ ID NO：6所示序列的引物的終濃度為0.8μmol/L；

SEQ ID NO：7所示序列的PNA探針的終濃度為0.8μmol/L。

9.一種用于非診斷和非治療目的的檢測JAK2V617F基因突變的方法，其特征在于，以被測樣本的DNA模板，采用權利要求1～3中任一項所述的引物組合物進行LAMP反應，然后采用濁度法或可視化判讀來鑒定樣本是否為JAK2V617F突變陽性。

10.根據權利要求9所述的檢測JAK2V617F基因突變的方法，其特征在于，所述LAMP反應的條件為：55℃-70℃，30-60min。