[發明專利]基于磁富集的熒光定量高靈敏可視化聯檢免疫層析試紙條的制備和檢測方法

有效

• 申請號: 201711001412.7
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN107677806B
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發明（設計）人: 常津;張博;宮曉群;高瑋辰
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/574
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王麗

1.基于磁富集的熒光定量高靈敏可視化聯檢免疫層析試紙條的制備方法，其特征是步驟如下：

1)高分子多包裹磁納米球免疫探針的制備：將PLGA(聚乳酸-羥基乙酸共聚物)包裹后的帶有羧基的水溶性磁納米球，乳腺癌相關標志物CA153標記抗體或癌胚抗原CEA標記抗體，EDC鹽酸鹽(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽)溶解于反應溶液，渦旋儀上以50-60r/min的速度旋轉混勻，然后將混合溶液置于旋轉混合架上，室溫懸培，活化磁納米球表面的羧基，離心，最后偶聯上抗體的磁納米球用BSA封閉過夜；

2)試紙條的組裝：從樣品池往上依次是樣品墊、在硝酸纖維素膜的特定區域噴有用熒光素Cy5標記的CA153抗體即檢測線1，用熒光素Cy5標記的CEA抗體即檢測線2，噴有IgG抗體的區域即質控線以及末端的吸水墊。

2.如權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟1)中磁納米球為Fe₃O₄磁性納米顆粒，高分子PLGA與Fe₃O₄磁性納米顆粒用量的質量分數配比是10-20：1。

3.如權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟1)中，磁納米球和EDC鹽酸鹽用量的質量分數配比是40-80：1。

4.如權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟1)中，磁納米球和CA153抗體用量的質量分數配比是15-35：1；磁納米球和CEA抗體用量的質量分數配比是8-20：1。

5.如權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟1)中，磁納米球偶聯抗體懸培1.5～2h后，離心，洗滌。

6.如權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟1)中，BSA封閉液用量為1％～3％。