[發明專利]可誘導的轉基因小鼠心肌病動物模型的構建方法及應用

有效

• 申請號: 201711001389.1
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN108018310B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 彭天慶;黃一帆;曹婷;鄭東;張露露
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12N15/70;A01K67/027
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 馮瑞

1.一種可誘導的轉基因小鼠心肌病動物模型的構建方法，其特征在于，采用含有calpain-1基因的表達載體，包括以下步驟：

(1)將所述含有calpain-1基因的表達載體導入小鼠受精卵，然后將獲得的受精卵移入受體小鼠子宮進行妊娠，經過篩查獲得陽性子代轉基因小鼠；所述含有calpain-1基因的表達載體包括依次連接的Tet操縱子、α-MHC啟動子核酸序列、線粒體信號肽序列以及calpain-1的基因片段；線粒體信號肽的序列如SEQ ID No.1所示；

(2)將所述陽性子代轉基因小鼠與特異性表達四環素反式激活子的轉基因小鼠或特異性表達反義四環素反式激活子的轉基因小鼠交配，在雜交子代中挑選心肌特異性的線粒體選擇性過表達calpain-1的轉基因小鼠，即為所述可誘導的轉基因小鼠心肌病動物模型。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：含有calpain-1基因的表達載體的出發載體為真核表達載體。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于：所述真核表達載體為Alpha-MyHCclone26質粒。

4.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述含有calpain-1基因的表達載體的制備方法包括以下步驟：

(S1)在calpain-1的基因片段的5’端連接Tet操縱子、α-MHC啟動子核酸序列和線粒體信號肽序列，PCR擴增，得到PCR擴增產物；

(S2)將所述PCR擴增產物和真核表達載體經酶切、連接后，得到重組質粒；

(S3)將所述重組質粒轉入大腸桿菌，提取質粒并經PCR擴增、酶切，得到所述含有calpain-1基因的表達載體。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：在步驟(S2)中，使用限制性內切酶NotI或BamH I進行酶切。

6.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：在步驟(S2)中，連接時使用T4 DNA連接酶。

7.根據權利要求1所述的構建方法得到的轉基因小鼠心肌病動物模型在篩選治療心肌病藥物的應用。