[發明專利]一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼及黃花烏頭的鑒定方法

有效

• 申請號: 201710998366.6
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107541521B
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 楊俊波;何俊;王家艷;王紅;李德銖
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明公開了一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼及黃花烏頭的鑒定方法，屬于分子鑒定技術領域。通過廣泛調查烏頭屬藥用植物分布區，并盡可能的在物種分布區內進行多個地方采樣，構建該屬藥用植物ITS序列的條形碼大數據庫，然后通過比較發現黃花烏頭特有的ITS序列特有信息位點，進一步獲得其特有的DNA條形碼：所述DNA條形碼為由引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2擴增得到的總長為629bp的序列，第89bp為A，第443bp為A，第447bp為A，第491bp和第492bp為AT，第499bp為T，第577bp為C。利用該DNA條形碼將大大有利于藥用植物黃花烏頭的快速鑒定。

技術領域

本發明涉及分子鑒定技術領域，尤其涉及一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼，及利用該DNA條形碼鑒定黃花烏頭的方法。

背景技術

黃花烏頭(Aconitum coreanum(H.Léveillé)Rapaics)，又名關附子、白附子、山喇叭花和黃烏拉花等，為毛莨科烏頭屬多年生草本藥用植物，是吉林省特別是長白山區道地藥材。其塊根關白附入藥，具有祛風、燥濕、化痰止痛之功效。烏頭屬植物在我國有200余種，同時該屬植物均屬為有毒植物，烏頭類藥材使用中同名異物或同物異名的現象普遍存在。國內報道烏頭類藥中毒屢見不鮮，各種烏頭屬植物依據傳統形態或顯微鑒定方法不易辨識。

DNA條形碼技術(DNA Barcoding)是通過對一個標準目的基因的DNA序列進行分析，從而快速、準確地進行物種鑒定的技術。近幾年來，DNA條形碼技術已經被證明是一個行之有效的生物鑒定手段，不僅可對傳統鑒定方法作強有力的補充，而且因為其更客觀、準確，突破以往對經驗的過渡依賴，能幫助鑒定物種、發現新種等。

目前，在烏頭屬藥用植物的相關分子鑒定研究中，存在物種鑒定庫構建時樣品取樣不足，未能考慮不同物種間或同一物種內可能存在不同個體間變異位點異同的問題，導致鑒定的可靠性差，準確率低。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼，及利用該DNA條形碼鑒定黃花烏頭的方法，提高鑒定結果的可靠性和準確率。

本發明的技術方案如下：

本發明提供一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼，所述DNA條形碼為由引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2擴增得到的總長為629bp的序列，第89bp為A，第443bp為A，第447bp為A，第491bp和第492bp為AT，第499bp為T，第577bp為C。

優選的，所述DNA條形碼的序列如SEQ ID NO.3所示。

本發明還提供一種基于大數據DNA條形碼的黃花烏頭鑒定方法，包括以下步驟：

(1)提取待測樣本DNA；

(2)利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，得到629bp的擴增產物，所述DNA條形碼引物序列為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

(3)對所述擴增產物進行測序，按照下列特異性位點進行黃花烏頭物種鑒別的序列特征比對：第89bp為A，第443bp為A，第447bp為A，第491bp和第492bp為AT，第499bp為T，第577bp為C；

若擴增產物符合上述條件，則該待測樣本為黃花烏頭。

優選的，所述PCR的擴增體系為25μL，組份配比如下：10μmol/L正反向引物各1.0μL，25mmol/L 10×PCRbuffer 2.5μL，2.5mM dNTP 2.5μL，5unit/μL Taq DNA聚合酶0.25μL，50～100ng/L模板DNA 1.0μL，ddH2O 16.75μL。