[發明專利]一種基于大數據的黃花烏頭DNA條形碼及黃花烏頭的鑒定方法

有效

• 申請號: 201710998366.6
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107541521B
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 楊俊波;何俊;王家艷;王紅;李德銖
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種基于大數據DNA條形碼鑒定位點的黃花烏頭鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取待測樣本DNA；

（2）利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，得到擴增產物，所述DNA條形碼引物序列為SEQID NO.1和SEQ ID NO.2；

（3）對所述擴增產物進行測序，測序結果與SEQ ID NO.3比對，特異性位點為：第89bp為A，第443bp為A，第447bp為A，第491bp和第492bp為AT，第499bp為T，第577bp為C；

若擴增產物符合上述特異性位點序列信息，則該待測樣本為黃花烏頭。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR的擴增體系為25μL，組份配比如下：10μmol/L正反向引物各1.0μL，25mmol/L 10×PCR緩沖液2.5μL，2.5mM dNTP 2.5μL，5unit/μL Taq DNA聚合酶 0.25μL，50~100ng/L模板DNA 1.0μL，ddH₂O 16.75μL。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR的擴增條件為：94℃預變性2 min，1循環；94℃變性30s，52℃退火1min，72℃延伸2min，35個循環；72℃延伸7min。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測序為雙向測序，所述測序的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述測序的反應體系為5μL：其中ddH₂O 3μL，10μmol/L正反向引物各0.25μL，測序反應混合物0.5μL，PCR純化產物1μL。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述測序的反應條件為：96℃預變性10s，50℃退火5s，60℃延伸4min，33個循環。