[發明專利]用于核酸合成和擴增的組合物、方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201710996371.3
• 申請日: 2011-06-20
• 公開（公告）號: CN107760770B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: C·胡;J·伯克曼;P·嚴
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 李程達

1.魚膠在制備具有增加的對PCR抑制劑的耐受性的用于RT-PCR的組合物中的用途，所述組合物包含：

至少一種熱穩定性DNA聚合酶，

至少一種熱穩定性逆轉錄酶(RT)，和

魚膠，其中相對于不含任何PCR抑制劑阻斷劑的組合物，所述魚膠增強對一種或多種PCR抑制劑的耐受性并且降低Ct；

其中所述PCR抑制劑選自腐殖酸和肝素；并且

其中與不含所述魚膠的組合物相比，所述耐受性增加。

2.權利要求1的用途，其中所述熱穩定性逆轉錄酶為M-MLV逆轉錄酶或其突變體、變體或衍生物。

3.權利要求2的用途，其中所述MMLV RT包含選自Y64、R116、D124、H126、Y133、K152、Q190、T197、H204、V223、M289、T306和F309的一個或多個突變。

4.權利要求1的用途，其中所述熱穩定性DNA聚合酶為Taq DNA聚合酶或其突變體、變體或衍生物。

5.權利要求1的用途，其中所述組合物在-20℃為液體或凝膠。

6.權利要求1的用途，其中所述組合物在-20℃不為固體。

7.權利要求1的用途，其中所述組合物在-20℃不凍結。

8.權利要求1的用途，其中當貯存于-20℃時，所述組合物在使用之前不需要解凍。

9.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含一種或多種核苷酸(dNTP)。

10.權利要求9的用途，其中所述核苷酸選自dTTP、dATP、dCTP、dGTP或dUTP。

11.權利要求9的用途，其中所述核苷酸的每一種的濃度為約0.5mM至5mM。

12.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含甘油。

13.權利要求12的用途，其中所述甘油的濃度為5％-50％。

14.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含RNA酶抑制蛋白(RIP)。

15.權利要求14的用途，其中所述RIP的濃度為0.1U/μL至1.0U/μL。

16.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含去垢劑。

17.權利要求16的用途，其中所述去垢劑為NP-40或TWEEN 20。

18.權利要求16的用途，其中所述去垢劑的濃度為0.005％至0.05％。

19.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含被動參考對照。

20.權利要求19的用途，其中所述被動參考對照為ROX染料。

21.權利要求1的用途，其中所述組合物用于核酸合成、核酸擴增或RT-PCR法。

22.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含濃度為約500ng/μl至5000ng/μl的BSA，并且其中所述魚膠的濃度是約0.4％至4％。

23.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含濃度為約800ng/μl的BSA，并且其中所述魚膠的濃度是約0.5％。