[發(fā)明專(zhuān)利]一種表征卷煙煙氣對(duì)口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710988308.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107764762A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪梅;高茜;米其利;夭建華;曾婉俐;劉欣;向明;楊葉昆;其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開(kāi)姓名
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/31
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 昆明正原專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生,于洪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種表征卷煙煙氣對(duì)口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法。

背景技術(shù)

卷煙的感官感受主要取決于煙氣中種類(lèi)繁多的化學(xué)成分與口腔之間的相互作用。傳統(tǒng)卷煙感官淺析與評(píng)價(jià)依賴(lài)于人工評(píng)吸，但人工評(píng)吸受到評(píng)吸人員自身因素及外部環(huán)境的影響，這給卷煙評(píng)價(jià)結(jié)果帶來(lái)了不確定的因素。新型感官淺析技術(shù)例如基于多傳感列陣的電子舌技術(shù)，可根據(jù)電子舌輸出的傳感器響應(yīng)值計(jì)算出樣品味覺(jué)的強(qiáng)度，但對(duì)于余味、收斂感及生津感等三項(xiàng)指標(biāo)中，并未得到較為理想的擬合效果。因此如何通過(guò)合適的生物化學(xué)方法來(lái)對(duì)卷煙煙氣收斂感進(jìn)行表征對(duì)卷煙配方的優(yōu)化調(diào)整起著重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種表征卷煙煙氣對(duì)口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，該方法采用生物化學(xué)檢測(cè)方法，其結(jié)果為卷煙煙氣的感官評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種表征卷煙煙氣對(duì)口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，包括如下步驟：

步驟（1），配制含1mg/mL唾液淀粉酶的人工唾液，離心，取上清，得到唾液上清；

步驟（2），采用專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枮?01520354840.8的一種用于研究主流煙氣暴露于口腔中的仿生吸收裝置，采用步驟（1）的唾液上清浸潤(rùn)模擬人工口腔黏膜內(nèi)壁；選取10-20支重量和吸阻一致的煙支作為待表征樣品，平衡后進(jìn)行抽吸；

步驟（3），抽吸結(jié)束后，取出步驟（2）中仿生吸收裝置的瓶體中的液體，離心，取上清，得到仿生上清；

步驟（4），分別向步驟（1）得到的唾液上清、步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍(lán)G-250溶液，混勻，室溫放置10min，得到染色唾液上清和染色仿生上清；

其中，向步驟（2）得到的唾液上清中加入考馬斯亮藍(lán)G-250溶液的體積為唾液上清體積的19倍；向步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍(lán)G-250溶液的體積為仿生上清體積的19倍；

步驟（5），用分光光度計(jì)分別測(cè)定步驟（4）得到的染色唾液上清和染色仿生上清在595 nm處的吸光值，根據(jù)蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算染色唾液上清和染色仿生上清中蛋白質(zhì)含量；

步驟（6），根據(jù)步驟（5）得到的染色唾液上清和染色仿生上清中蛋白質(zhì)含量，計(jì)算唾液淀粉酶沉淀比例；唾液淀粉酶沉淀比例=（染色唾液上清蛋白質(zhì)含量-染色仿生上清中蛋白質(zhì)含量）÷染色唾液上清蛋白質(zhì)含量；該沉淀比例即為待表征樣品的收斂感。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（1）所述的離心速度為10000-12000rpm/min，時(shí)間為10-15min。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（2）所述的平衡條件為：溫度22±1℃，濕度60±2%，時(shí)間48h。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（2）所述的抽吸采用全自動(dòng)轉(zhuǎn)盤(pán)式吸煙機(jī)。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（2）所述的抽吸的抽吸頻率為1口/min，抽吸持續(xù)時(shí)間為2s，抽吸容量為35mL±0.15mL/口。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（2）中，浸潤(rùn)模擬人工口腔黏膜內(nèi)壁所用的唾液上清的量為5 mL。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（3）所述的離心速度為10000-12000rpm/min，時(shí)間為10-15min。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，在細(xì)胞培養(yǎng)板中向步驟（1）得到的唾液上清中加入考馬斯亮藍(lán)G-250溶液；在細(xì)胞培養(yǎng)板中向步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍(lán)G-250溶液。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述的細(xì)胞培養(yǎng)板為96孔板。

進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟（4）中，唾液上清和仿生上清均設(shè)三個(gè)平行樣進(jìn)行染色，蛋白質(zhì)含量計(jì)算時(shí)，為三個(gè)平行樣的均值。

抽吸時(shí)，全自動(dòng)轉(zhuǎn)盤(pán)式吸煙機(jī)連接在裝置的煙氣進(jìn)氣管上。

本發(fā)明中所述的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線按照考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的常規(guī)方法進(jìn)行制作即可，無(wú)特殊限制。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：

本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)單，利用唾液蛋白沉淀會(huì)產(chǎn)生收斂感的原理，采用唾液淀粉酶模擬唾液中的蛋白環(huán)境，用其沉淀比例來(lái)定量表征收斂感的大小。同時(shí)采用口腔仿生吸收裝置，從而更好的模擬煙氣與口腔唾液作用的過(guò)程。本方法可用于卷煙煙氣對(duì)口腔收斂感的定量表征，為卷煙煙氣的感官評(píng)價(jià)提供參考。

附圖說(shuō)明

圖1為5種不同牌號(hào)卷煙的唾液淀粉酶沉淀比例圖；

圖2為唾液淀粉酶沉淀比例與收斂感打分相關(guān)性分析圖。

具體實(shí)施方式