[發明專利]一種表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法

在審

• 申請號: 201710988308.5
• 申請日: 2017-10-21
• 公開（公告）號: CN107764762A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 李雪梅;高茜;米其利;夭建華;曾婉俐;劉欣;向明;楊葉昆;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生,于洪

1.一種表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟（1），配制含1mg/mL唾液淀粉酶的人工唾液，離心，取上清，得到唾液上清；

步驟（2），采用專利申請號為201520354840.8的一種用于研究主流煙氣暴露于口腔中的仿生吸收裝置，采用步驟（1）的唾液上清浸潤模擬人工口腔黏膜內壁；選取10-20支重量和吸阻一致的煙支作為待表征樣品，平衡后進行抽吸；

步驟（3），抽吸結束后，取出步驟（2）中仿生吸收裝置的瓶體中的液體，離心，取上清，得到仿生上清；

步驟（4），分別向步驟（1）得到的唾液上清、步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍G-250溶液，混勻，室溫放置10min，得到染色唾液上清和染色仿生上清；

其中，向步驟（2）得到的唾液上清中加入考馬斯亮藍G-250溶液的體積為唾液上清體積的19倍；向步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍G-250溶液的體積為仿生上清體積的19倍；

步驟（5），用分光光度計分別測定步驟（4）得到的染色唾液上清和染色仿生上清在595 nm處的吸光值，根據蛋白標準曲線，計算染色唾液上清和染色仿生上清中蛋白質含量；

步驟（6），根據步驟（5）得到的染色唾液上清和染色仿生上清中蛋白質含量，計算唾液淀粉酶沉淀比例；唾液淀粉酶沉淀比例=（染色唾液上清蛋白質含量-染色仿生上清中蛋白質含量）÷染色唾液上清蛋白質含量；該沉淀比例即為待表征樣品的收斂感。

2.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（1）所述的離心速度為10000-12000rpm/min，時間為10-15min。

3.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（2）所述的平衡條件為：溫度22±1℃，濕度60±2%，時間48h。

4.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（2）所述的抽吸采用全自動轉盤式吸煙機。

5.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（2）所述的抽吸的抽吸頻率為1口/min，抽吸持續時間為2s，抽吸容量為35mL±0.15mL/口。

6.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（2）中，浸潤模擬人工口腔黏膜內壁所用的唾液上清的量為5 mL。

7.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（3）所述的離心速度為10000-12000rpm/min，時間為10-15min。

8.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，在細胞培養板中向步驟（1）得到的唾液上清中加入考馬斯亮藍G-250溶液；在細胞培養板中向步驟（3）得到的仿生上清中加入考馬斯亮藍G-250溶液。

9.根據權利要求8所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，所述的細胞培養板為96孔板。

10.根據權利要求1所述的表征卷煙煙氣對口腔收斂感影響的體外仿生模擬方法，其特征在于，步驟（4）中，唾液上清和仿生上清均設三個平行樣進行染色，蛋白質含量計算時，為三個平行樣的均值。