[發明專利]一種水產養殖用復合微生物菌劑的制備方法

在審

• 申請號: 201710987802.X
• 申請日: 2017-10-21
• 公開（公告）號: CN107603911A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 石磊;李璐;尹凱欣
• 申請（專利權）人: 石磊
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C02F3/34;C05F11/08;C12R1/125;C12R1/72;C12R1/01;C02F103/20
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司11403
• 代理人: 馬驍

1.一種水產養殖用復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，該制備方法包括如下步驟：

（1）將混合菌粉加入初級培養液進行活化并混合培養，得混合菌液，再將混合菌液加入二級培養液中擴大培養至對數生長期，調節OD₆₀₀值，得待干燥混合菌液；

（2）將上述待干燥混合菌液放入離心機中離心，移去上清液，得到沉淀，將沉淀、水及凍干保護劑混合均勻，得菌懸液，將制得的菌懸液移入真空冷凍干燥機中冷凍干燥，得干燥物；

（3）將上述干燥物與干燥物質量4倍的蒸餾水，混勻后離心，移去上層清液，收集下層沉淀，并將下層沉淀干燥恒重后，冷卻，得到復合菌劑的基體；

（4）將上述復合菌劑的基體添加發酵營養液進行發酵，發酵完成后，收集發酵物，將發酵物、混合微量元素添加劑、100目的蛭石混合均勻，靜置，冷凍干燥，粉碎過篩，收集過篩顆粒，得水產養殖用復合微生物菌劑。

2.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中混合菌粉中包括枯草芽孢桿菌、產朊假絲酵母及雙歧桿菌，枯草芽孢桿菌、產朊假絲酵母及雙歧桿菌的質量比為2：1：1，初級培養液配方按重量份數計，取牛肉膏1.2~2份、胰酪胨2.5~5份、馬鈴薯全粉8~10份、瓊脂12~15份、葡萄糖1.5~2.5份、NaCl 3~5份、KH₂PO₄ 1.2~2.5份、吐溫-80 0.6~1份、半胱胺酸 0.2~0.8份、水1000 份，pH值7.0 ± 0.2，121 ℃滅菌30min，得初級培養液。

3.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中擴大培養的條件：溫度為30~35 ℃，培養時間18~24h；OD₆₀₀的調節值為1.5，若OD₆₀₀＞1.5，用二級培養液稀釋至 OD₆₀₀=1.5；若OD₆₀₀＜1.5可先離心后移去部分上清液，再調整至 OD₆₀₀=1.5，二級培養液的配方按重量份數計，取胰酪胨12~17份、蛋白胨1~5份、牛肉膏0.2~0.5份、麥芽糖20~40份、葡萄糖10~15份、NaCl 1~3 份、瓊脂15~20份、KH₂PO₄ 1.2~2.5份、MgSO₄·7H₂O 0.8~1.6份、維生素5~10份、水1000 份，pH值7.2 ± 0.1，121 ℃滅菌 20min，得二級培養液。

4.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中凍干保護劑是質量分數為40%甘油溶液，沉淀、水及凍干保護劑得質量比為1：6：4。

5.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中發酵營養液的配方按重量份數計，取麩皮10~15份，蛋白胨10~15份，小米粉16~20份，Na₂CO₃1.2~2份、MgSO₄·7H₂O 0.1~0.2份、FeSO₄·7H₂O 0.01~0.03份、NaCl 2~6份、水1000份，攪拌均勻，得發酵營養液；所述發酵條件為20~35℃，時間為18~24h。

6.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中發酵物、混合微量元素添加劑、100目的蛭石的質量比為2：1：6，微量元素添加劑的組份包括，按質量份數計，取FeSO₄·7H₂O 0.03~0.05份、ZnSO₄·7H₂O 0.01~0.05份、Na₂SeO₃ 0.03~0.09份、MgSO₄·7H₂O 0.05~0.2份、Ca(IO₃)₂ 0.02~0.09份。