[發明專利]一種治療耐藥結核的生物制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201710987422.6
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107812013B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 胥萍;徐俊馳;吳妹英;徐俊華;宋華峰;張建平;葉志堅;陳慧;唐佩軍;趙靜;陳興年;時翠林;吳敏娟;朱曉燕;王鳳平
• 申請（專利權）人: 胥萍
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種治療耐藥結核的生物制劑，其特征在于，所述治療耐藥結核的生物制劑為結核特異性淋巴細胞，利用IL-1α、IL-2，CD3單克隆抗體，結核桿菌特異性抗原CFP10,ESAT6制備；

所述治療耐藥結核的生物制劑的制備方法包括以下步驟：

步驟一，取正常人外周血，與PBS按照1:2的比例稀釋后進行Ficoll密度梯度離心；將提前置于室溫條件的Ficoll加入華氏管中，按照Ficoll：稀釋血液＝1：2的比例，沿管壁緩慢加入稀釋血液，于控溫離心機中離心1800rpm/min，30min，20～24℃；離心結束后；用移液管仔細吸取云霧層細胞，用10倍體積的PBS洗滌離心，得到PBMC；

步驟二，將PBMC細胞用RMPI1640完全培養基配成細胞懸液，然后于各組細胞培養液中加入相應細胞因子：第0天加入抗CD3mAb 100ng/ml，IFN-γ1000U/ml，IL-1α10ng/ml，CFP1010ng/ml，ESAT6 10ng/ml，將細胞置于37℃、5％CO₂、飽和濕度95％的CO₂培養箱內培養；

步驟三，第一天加IL-2 1000U/ml，之后視細胞狀態每隔3天補一次細胞因子液，補液細胞因子為IL-2 500U/ml；

步驟四，在培養的第十天，進行細菌培養，內毒素檢測，流式細胞術檢測亞群變化，完成結核特異性T細胞的制備；

所述結核特異性淋巴細胞是指將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子，CD3單克隆抗體、IL-2、IFN-γ和結核桿菌特異性抗原CFP10,ESAT6共同培養獲得的一群特異性淋巴細胞；

培養基為淋巴細胞培養基；

淋巴細胞培養基包括藥用級的人類白蛋白，CD3單克隆抗體、IL-2、IFN-γ和結核桿菌特異性抗原CFP10,ESAT6。