[發明專利]一種添加鼠尾草酸的豬卵母細胞體外成熟培養液及其應用

有效

• 申請號: 201710985604.X
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107574144B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 李秋艷;黎明;羅潔;李淑芝;李志遠
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種添加鼠尾草酸的卵母細胞體外成熟培養液及其應用。所述體外成熟培養液，其特征在于，組分包括鼠尾草酸；所述鼠尾草酸濃度范圍為1?20μM。本發明通過在豬卵母細胞成熟培養液中添加鼠尾草酸，配合其他組分的協同作用，提高了豬卵母細胞成熟質量，對豬胚胎早期發育有良好的促進效果。結果表明，濃度適宜的鼠尾草酸可有效提高卵母細胞成熟質量，從而提升豬卵母細胞體外發育潛力。且該體外成熟培養液制備簡單，操作方便，具有較大應用前景。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種添加鼠尾草酸的卵母細胞體外成熟培養液及其應用。

背景技術

隨著胚胎移植、冷凍精液技術、克隆轉基因技術的發展，卵母細胞需求量越來越大。卵母細胞體外成熟受眾多因素的調控，調控機制比較復雜，對其進行研究不論對于卵成熟機理的理論還是胚胎實際生產，都具有重要的意義。由于利用豬的超數排卵技術所獲得的卵母細胞或者胚胎數量是極其有限的，并不能滿足大量優質卵母細胞的需求，而且操作復雜、成本較高，所以體外成熟技術就顯得尤為重要。豬卵母細胞體外成熟是指從屠宰場直接采集廢棄卵巢，取出未成熟的卵母細胞后，在體外模擬體內成熟環境來達到成熟的目的。由于豬卵母細胞含有相對大量的脂肪滴，對溫度比較敏感，體外操作難度相對更大。目前體外成熟培養的卵母細胞和體內生產的胚胎相比，體外成熟卵的體外胚胎發育到囊胚的比率低下。針對這些問題，各研究學者對豬卵母細胞的成熟進行了不斷地研究，希望不斷提高體外成熟卵母細胞的質量。因此，優化卵母細胞體外成熟培養條件對提高體外胚胎生產效率具有重要意義。

發明內容

本發明提供一種添加鼠尾草酸的卵母細胞體外成熟培養液及其應用。

本發明的第一個目的，提供一種添加鼠尾草酸的卵母細胞體外成熟培養液，其組分包括鼠尾草酸。優選地，所述鼠尾草酸濃度為1-20μM。

進一步優選地，鼠尾草酸濃度范圍2-10μM，以2-5μM為最優。

本發明通過在卵母細胞體外成熟培養液中添加鼠尾草酸，提高了卵母細胞成熟質量，對胚胎發育有良好的促進效果。

優選地，組分還包括卵母細胞常規培養液，谷氨酰胺，慶大霉素，孕馬血清促性腺激素，人絨毛膜促性腺激素，豬卵泡液，血清；

優選地，所述卵母細胞常規培養液體積比為70-80％，所述谷氨酰胺濃度為0.02-0.06g/L，所述慶大霉素濃度為0.1-0.2g/L，所述孕馬血清促性腺激素濃度為20000-25000U/L，所述人絨毛膜促性腺激素濃度為10000-15000U/L，所述卵泡液濃度體積比為8-12％，所述血清濃度體積比為8-12％。

關于卵母細胞常規培養液，優選地，所述卵母細胞常規培養液為Medium199，DMEM，TCM中的一種。進一步優選為Medium199。

關于血清，優選地，所述血清為小牛血清，胎牛血清或新生牛血清中的一種。

本發明提供一種較為優選的卵母細胞體外成熟培養液，配方如下：Medium199體積比為75-80％，谷氨酰胺為0.02-0.06g/L，慶大霉素濃度為0.12-0.16g/L，孕馬血清促性腺激素濃度為20000-25000U/L，人絨毛膜促性腺激素濃度為10000-15000U/L，豬卵泡液濃度體積比為8-12％，血清濃度體積比為8-12％，鼠尾草酸濃度為2-5μM。

本發明提供的體外成熟培養液可提高卵母細胞抗氧化能力，活性成分的協同作用可有效提高卵母細胞成熟質量，從而提升卵母細胞體外發育潛力，在應用本發明所述的體外成熟培養液培養卵母細胞時，能夠有效減少外界環境帶來的應激損傷，促進卵母細胞的細胞質成熟，提高了體外成熟的卵母細胞孤雌激活和受精后的胚胎發育能力。且該體外成熟培養液制備簡單，操作方便，具有較大應用前景。

本發明還提供上述體外成熟培養液在培養動物的卵母細胞的應用。