[發明專利]一種添加鼠尾草酸的豬卵母細胞體外成熟培養液及其應用

有效

• 申請號: 201710985604.X
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107574144B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 李秋艷;黎明;羅潔;李淑芝;李志遠
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種豬卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于，由鼠尾草酸以及卵母細胞基礎培養液、谷氨酰胺、慶大霉素、孕馬血清促性腺激素、人絨毛膜促性腺激素、卵泡液和血清組成；所述鼠尾草酸的濃度范圍為1–20 μM。

2.根據權利要求1所述的體外成熟培養液，其特征在于，所述卵母細胞體外成熟培養液中，所述卵母細胞基礎培養液的濃度體積比為70-80%，所述谷氨酰胺的濃度為0.02-0.06g/L，所述慶大霉素的濃度為0.1-0.2g/L，所述孕馬血清促性腺激素的濃度為20000-25000U/L，所述人絨毛膜促性腺激素的濃度為10000-15000U/L，所述卵泡液的濃度體積比為8-12%，所述血清的濃度體積比為8-12%。

3.根據權利要求1或2所述的體外成熟培養液，其特征在于，所述卵母細胞基礎培養液為Medium199，DMEM，TCM中的一種。

4.根據權利要求1或2所述的體外成熟培養液，其特征在于，所述血清為小牛血清，胎牛血清或新生牛血清中的一種。

5.根據權利要求3所述的體外成熟培養液，其特征在于，所述血清為小牛血清，胎牛血清或新生牛血清中的一種。

6.根據權利要求1、2、5任一項所述的體外成熟培養液，其特征在于，配方如下：

Medium199體積比為75-80%，谷氨酰胺為 0.02-0.06g/L，慶大霉素濃度為0.12-0.16g/L，孕馬血清促性腺激素濃度為20000-25000U/L，人絨毛膜促性腺激素濃度為10000-15000U/L，豬卵泡液濃度體積比為8-12%，血清濃度體積比為8-12%，鼠尾草酸濃度為2-5μM。

7.根據權利要求3所述的體外成熟培養液，其特征在于，配方如下：

Medium199體積比為75-80%，谷氨酰胺為 0.02-0.06g/L，慶大霉素濃度為0.12-0.16g/L，孕馬血清促性腺激素濃度為20000-25000U/L，人絨毛膜促性腺激素濃度為10000-15000U/L，豬卵泡液濃度體積比為8-12%，血清濃度體積比為8-12%，鼠尾草酸濃度為2-5μM。

8.利用權利要求1-7任一項所述的豬卵母細胞體外成熟培養液培養卵母細胞的應用，其特征在于，將卵母細胞放入平衡后的所述卵母細胞體外成熟培養液中，后置于CO₂體積濃度4%-6%的環境內成熟培養42~44小時，即得。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述平衡具體為：將所述卵母細胞體外成熟培養液平衡至少3小時。

10.根據權利要求8或9所述的應用，其特征在于，所述成熟培養的溫度為38-39℃。