[發(fā)明專利]一種利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710985381.7
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN108387557A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安曉萌
• 申請（專利權(quán)）人: 香港大學(xué)深圳醫(yī)院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 深圳市合道英聯(lián)專利事務(wù)所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果;侯峰

1.一種利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法，其特征在于，步驟為：

將瓊脂糖溶液在載玻片上制備成瓊脂糖固定墊，通過注射油將線蟲蟲體固定在瓊脂糖固定墊上，使用倒置熒光顯微鏡觀察線蟲蟲體中熒光信號的表達(dá)，在體視顯微鏡下，滴加恢復(fù)緩沖液至檢測到熒光信號的線蟲上方，等線蟲浮起并開始活動后挑至培養(yǎng)板上，常規(guī)培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法，其特征在于，步驟為：

(1)制備瓊脂糖固定墊：取加熱溶解的1.5％瓊脂糖溶液滴在載玻片上，用另一載玻片輕壓其上，待瓊脂糖凝固后，將上面的玻片從側(cè)面滑下，制備成瓊脂糖固定墊；

(2)固定線蟲：用注射油在瓊脂糖固定墊上畫一條線，將線蟲挑至注射油里，調(diào)整線蟲位置使其整齊排列在注射油一側(cè)或兩側(cè)，將排列整齊的線蟲進(jìn)行編號；

(3)熒光信號觀察：將固定有線蟲的載玻片放置在倒置熒光顯微鏡載物臺上，有蟲體的一面向上，依次觀察線蟲中熒光信號的表達(dá)，記錄下有熒光表達(dá)的線蟲的編號；

(4)制備恢復(fù)緩沖液：在M9緩沖液中添加4％葡萄糖；

(5)線蟲恢復(fù)：在體視顯微鏡下，滴加恢復(fù)緩沖液至檢測到熒光信號的線蟲上方，等線蟲浮起并開始活動后挑至培養(yǎng)板上，常規(guī)培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法，其特征在于，步驟(1)所述的瓊脂糖溶液為60-70℃，瓊脂糖固定墊的厚度為0.8-1.2mm。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法，其特征在于，步驟(3)所述的倒置熒光顯微鏡使用10×物鏡。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用熒光顯微鏡快速挑選秀麗線蟲的方法，其特征在于，步驟(4)所述的M9緩沖液的制備方法是5.8g Na₂HPO₄,3g KH₂PO₄,0.5g NaCl，1g NH₄Cl，加水至1L，高壓滅菌。