[發明專利]一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710984231.4
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107505466A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 王平;李明黨;裴福彬;馬恩慧;余昊軒;董云會;李月云
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法及應用

一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法，所述方法包括：

（1）制備金納米棒分散液；

（2）制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液；

（3）制備檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的工作電極；

（4）制作檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的工作曲線。

2.如權利要求1所述一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）的制備金納米棒分散液包括：

①制備金晶種分散液

取2.5 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液和1.5 mL、1.0 mmol/L的氯金酸溶液置于50 mL圓底燒瓶中，在35.0 ℃水浴中強磁力攪拌30.0 min后，快速加入0.6 mL、0.01 mol/L的新配置的硼氫化鈉溶液，停止磁力攪拌，在35.0 ℃水浴中靜置3.0 h，得到金晶種分散液；

②制備金納米棒分散液

取50.0 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液，5.0 mL、15.0 mmol/L的氯金酸溶液，2.5 mL、4.0 mmol/L的硝酸銀溶液和45.0 mL超純水置于500 mL三口燒瓶中，搖勻后，置于35.0 ℃水浴中，緩慢加入1.25 mL、0.08 mol/L的抗壞血酸溶液，待混合液穩定后，將200.0 ~ 500.0 μL的金晶種分散液逐滴加入，在35.0 ℃水浴中靜置24.0 h后，離心，用超純水洗滌，將所得到的沉淀重新分散于20.0 mL超純水中，得到金納米棒分散液。

3.如權利要求1所述一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）的制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液包括：

①制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球

取2.5 mL、20.0 mmol/L的氯金酸溶液，2.5 mL、20.0 mmol/L的四氯鈀酸鈉溶液，4.0 mL、20.0 mmol/L的氯鉑酸溶液和0.1 g的Pluronic F127置于50 mL圓底燒瓶中，超聲分散后，置于油浴中，在磁力攪拌下迅速加入1.5 ~4.5 mL、0.4 mol/L的抗壞血酸溶液，油浴升溫至80.0 ℃，持續磁力攪拌1.0 h后，停止油浴，自然冷卻至室溫，離心，用超純水洗滌，將所得到的固體置于30.0 ℃真空干燥箱內干燥24.0 h，得到介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球；

②制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液

取3.0 ~ 9.0 mg介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球分散到1.0 mL、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液中，加入1.0 ~ 2.0 mL、10.0 ~ 20.0 μg/mL的乙型肝炎表面檢測抗體分散液，置于4.0 ℃恒溫振蕩培養箱中振蕩孵化8.0 ~ 12.0 h后，在1000 rpm轉速下離心0.5 ~ 1.5 min，得到下層沉淀，加入1.0 mL、pH=7.0的磷酸鹽緩沖溶液離心洗滌1次，將下層沉淀重新分散于1.0 mL、pH=7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，分散均勻，得到介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液，在4.0 ℃下保存。