[發(fā)明專利]一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710984231.4
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107505466A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王平;李明黨;裴福彬;馬恩慧;余昊軒;董云會;李月云
• 申請（專利權(quán)）人: 山東理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于新型納米材料、免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，具體涉及一種基于介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球的電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，以及由該方法構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器在檢測乙型肝炎表面抗原中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒感染是全球最嚴(yán)重的健康問題之一，乙型肝炎病毒攜帶者正在面臨由這種持續(xù)性感染引發(fā)并發(fā)癥的風(fēng)險，例如引發(fā)慢性肝炎、肝硬化和肝癌。乙型肝炎病毒感染的潛伏期約為半年，因此，乙型肝炎病毒感染的早期診斷對降低其并發(fā)癥發(fā)病率具有重要意義。乙型肝炎表面抗原是一種重要的乙型肝炎病毒標(biāo)志物，它能夠在潛伏期內(nèi)乙型肝炎病毒攜帶者的血液中被檢測出來，血液中乙型肝炎表面抗原的濃度為乙型肝炎病毒感染的早期診斷提供了重要依據(jù)。因此，發(fā)展高靈敏的乙型肝炎表面抗原的定量檢測方法對乙型肝炎病毒感染的早期診斷尤為重要。

電化學(xué)免疫傳感器是基于抗原和抗體特異性結(jié)合的一種分析方法，具有檢測迅速、檢出限低、靈敏度高、操作簡單和制備成本低的優(yōu)點。近年來，電化學(xué)免疫傳感器備受關(guān)注，被廣泛應(yīng)用于病毒標(biāo)志物或腫瘤標(biāo)志物的檢測中。本發(fā)明利用層層自組裝技術(shù)，以金納米棒為基底，以介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球作為乙型肝炎表面檢測抗體的標(biāo)記物，制備了一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器，實現(xiàn)了對乙型肝炎表面抗原的精確定量檢測，具有檢測范圍廣、檢測下限低、靈敏度高、操作簡單、檢測速度快等優(yōu)點，并且具有良好的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和選擇性，為乙型肝炎病毒感染的早期診斷提供了可靠的檢測手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器，所述電化學(xué)免疫傳感器包括：工作電極、對電極和參比電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾金納米棒、乙型肝炎表面捕獲抗體、牛血清蛋白、乙型肝炎表面抗原、介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標(biāo)記的乙型肝炎表面檢測抗體。所述對電極為鉑絲電極，所述參比電極為飽和甘汞電極。

本發(fā)明的目的之一是提供一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的制備方法。

本發(fā)明的目的之二是將所制備的一種檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器用于乙型肝炎表面抗原的檢測。

本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟。

（1）制備金納米棒分散液；

（2）制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標(biāo)記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液；

（3）制備檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的工作電極；

（4）制作檢測乙型肝炎表面抗原的電流型免疫傳感器的工作曲線。

其中，步驟（1）的制備金納米棒分散液，包括以下步驟：

①制備金晶種分散液

取2.5 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液和1.5 mL、1.0 mmol/L的氯金酸溶液置于50 mL圓底燒瓶中，在35.0 ℃水浴中強磁力攪拌30.0 min后，快速加入0.6 mL、0.01 mol/L的新配置的硼氫化鈉溶液，停止磁力攪拌，在35.0 ℃水浴中靜置3.0 h，得到金晶種分散液；

②制備金納米棒分散液

取50.0 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液，5.0 mL、15.0 mmol/L的氯金酸溶液，2.5 mL、4.0 mmol/L的硝酸銀溶液和45.0 mL超純水置于500 mL三口燒瓶中，搖勻后，置于35.0 ℃水浴中，緩慢加入1.25 mL、0.08 mol/L的抗壞血酸溶液，待混合液穩(wěn)定后，將200.0 ~ 500.0 μL的金晶種分散液逐滴加入，在35.0 ℃水浴中靜置24.0 h后，離心，用超純水洗滌，將所得到的沉淀重新分散于20.0 mL 超純水中，得到金納米棒分散液。

步驟（2）的制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球標(biāo)記的乙型肝炎表面檢測抗體分散液，包括以下步驟：

①制備介孔核殼型金@鈀@鉑三元合金納米微球