[發明專利]一種生化制劑TMB的合成方法

有效

• 申請號: 201710982159.1
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107652187B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 胡莉萍;孟慶榮;胡冠豐
• 申請（專利權）人: 荊楚理工學院
• 主分類號: C07C209/00
• 分類號: C07C209/00;C07C211/50
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 董路;王敏鋒

1.一種生化制劑TMB的合成方法，其特征在于包括如下步驟：

1.1、2,2′,6,6′-偶氮四甲苯胺-N,N-二氧化物的合成：

在乙醚和水的混合溶劑中，加入2,6-二甲基苯胺和催化劑鎢酸鈉，攪拌均勻，降溫至20～30℃，保溫并滴加雙氧水，其中過氧化氫與2,6-二甲基苯胺的摩爾比為1:2～4，滴完后繼續攪拌反應7～9小時，反應完成后，降溫到0～5℃，析出沉淀，過濾，洗滌，干燥，得到2,2′,6,6′-偶氮四甲苯胺-N,N-二氧化物；

1.2、2,2′,6,6′-四甲基二苯肼的合成：

在甲醇中，加入2,2′,6,6′-偶氮四甲苯胺-N,N-二氧化物，攪拌溶解，降至室溫，緩慢滴加硫氫化鈉和硫代硫酸鈉的混合溶液，2,2′,6,6′-偶氮四甲苯胺-N,N-二氧化物、硫氫化鈉和硫代硫酸鈉的摩爾比為1：3～5：0.4～0.5，滴完后升溫至70～75℃，回流2-3h，回流過程中控制體系的pH為9～9.4，回流結束后，常壓蒸餾回收甲醇，降溫析晶，過濾，用水洗滌濾餅至呈中性，干燥，得到2,2′,6,6′-甲苯基二苯肼；

1.3、TMB·(1/2)H₂SO₄的合成：

將2,2′,6,6′-四甲基二苯肼溶于氯苯中，在20～35℃下滴加緩慢硫酸溶液，2,2′,6,6′-四甲基二苯肼與H₂SO₄的摩爾比為1：5～7，滴完后升溫至40℃，繼續攪拌反應,0.5～1.5h，反應結束，向反應瓶內加水，升溫至98-100℃，攪拌溶解，靜置分層，分掉有機層，得到TMB·(1/2)H₂SO₄溶液；

1.4、TMB·2HCl的制備：

向步驟1.3所得的TMB·(1/2)H₂SO₄溶液中占總鹽酸溶液總質量25-35％的鹽酸溶液、活性炭和水合肼溶液，加熱至100℃進行脫色，脫色完成后熱濾，將濾液緩慢降溫至90-95℃，開始結晶，繼續保溫90-95℃，同時緩慢滴加剩余的鹽酸溶液，整個過程中，HCl與2,2′,6,6′-四甲基二苯肼的摩爾比為3:4，滴完后降至室溫，過濾，洗滌，干燥，得到TMB·2HCl；

1.5、TMB的制備：

在氮氣保護下，將TMB·2HCl加入甲醇中，控制反應瓶內的溫度在50℃以下，攪拌下緩慢加入片堿，TMB·2HCl與片堿的摩爾比為1：1.5～2.5，加完后繼續攪拌0.5～1.5h，升溫至55～65℃，熱濾，洗滌濾餅，將濾液緩慢降溫至0～5℃，開始結晶，結晶完成，過濾，洗滌，干燥，停止氮氣保護，得到TMB。

2.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：雙氧水的濃度為30wt％，雙氧水的滴加時間為0.5h-1.5h。

3.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：鎢酸鈉的質量為2,6-二甲基苯胺質量的15～20％。

4.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：硫氫化鈉和硫代硫酸鈉的混合溶液中，硫氫化鈉的濃度為35wt％，硫代硫酸鈉的濃度為12wt％，硫氫化鈉和硫代硫酸鈉的混合溶液滴加時間為1-2h。

5.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：步驟1.4中，繼續保溫90-95℃，先在3h內緩慢滴加鹽酸溶液總質量15-25％的鹽酸溶液，接著在2h內緩慢滴加剩余得鹽酸溶液，所述的鹽酸溶液的濃度為30wt％。

6.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：硫酸溶液的濃度為62.5wt％，滴加時間為2h。

7.根據權利要求1所述的生化制劑TMB的合成方法，其特征在于：步驟1.5中，將降溫結晶過濾后所得的母液濃縮，降溫至0～5℃，開始結晶，結晶完成后，過濾，洗滌，干燥，得到TMB。