[發(fā)明專利]一種黃鱔精子超低溫冷凍保存液及其冷凍復蘇方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710980208.8 | 申請日： | 2017-10-19 |
| 公開（公告）號： | CN107683850B | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發(fā)明（設計）人： | 呼光富;秦向鋒;劉香江;李忠;葉城;王衛(wèi)民;肖亞倩;周小云;鄒桂偉 | 申請（專利權）人： | 華中農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 黃鱔 精子 超低溫 冷凍 保存 及其 復蘇 方法 | ||
1.一種黃鱔精子超低溫冷凍保存液，其特征在于，所述冷凍保存液由以下成分制得：NaCl：5.85g/L，CaCl2：0.16g/L，KCl：0.15g/L，NaHCO3：1.5g/L，葡萄糖：0.3g/L，DMSO：7.5%；輔酶A：0.23mM，ATP：0.38mM，pH=8.0，其余為超純水；
以上所述的各物質(zhì)的濃度為與精液混合后各物質(zhì)的終濃度。
2.一種黃鱔精子冷凍保存與復蘇的方法，包括下述步驟：
（1）將黃鱔精液與NaCl，CaCl2，KCl，NaHCO3，葡萄糖，DMSO，輔酶A，ATP和超純水充分混合，使得混合后的溶液中各物質(zhì)的濃度為：
NaCl：5.85g/L，CaCl2：0.16g/L，KCl：0.15g/L，NaHCO3：1.5g/L，葡萄糖：0.3g/L，DMSO：7.5%；輔酶A：0.23mM，ATP：0.38mM，pH=8.0；混合后冰上平衡30-60分鐘；
（2）將稀釋后的精液分裝到細胞凍存管中；
（3）將凍存管放入裝有異丙醇的梯度降溫盒中放入-80°C超低溫冰箱中梯度降溫6-12h，
（4）將裝有精液的凍存管放入液氮中保存120d；
（5）精液的復蘇是將凍存管從液氮中取出后迅速置于37°C水浴鍋中復蘇解凍30-60秒，精子即解凍。
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