[發(fā)明專利]植物作為宿主在表達(dá)凝血九因子中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710979577.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-19
• 公開（公告）號(hào): CN109679985B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍駒;馬潔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京睿誠(chéng)海匯健康科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N15/57;C12N9/64
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

1.一種植物作為宿主表達(dá)凝血九因子的方法，其特征在于，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質(zhì)，獲得凝血九因子；

所述凝血九因子為人FIX；

所述農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透包括如下步驟：

步驟1：抽真空25～45s；

步驟2：保持真空-95kPa壓力30～60s；

步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；

重復(fù)上述步驟2～3次，避光處理4d；

所述植物為生菜；

所述表達(dá)載體包括凝血九因子的核苷酸序列和雙元植物載體；

所述凝血九因子為FIX；

所述表達(dá)載體的構(gòu)建方法包括如下步驟：

步驟1：在凝血九因子(FIX)的核苷酸序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點(diǎn)，在3’末端加入Sacl限制性酶切位點(diǎn)；

步驟2：克隆到載體pUC57載體中，獲得克隆載體pUC57-FIX；

步驟3：通過Xbal/Sacl從步驟2所得的克隆載體中獲得基因片段FIX，克隆至雙元植物載體pCam35S，獲得表達(dá)載體p35S-FIX；

所述凝血九因子的密碼子優(yōu)化后的FIXcDNA序列如SEQ ID No.3所示。