[發明專利]一種檢測甲狀腺球蛋白濃度的試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201710978759.0
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107870234A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 朱富強
• 申請（專利權）人: 施康培醫療科技（武漢）有限公司;王玨
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 楊立,陳璐

技術領域

本發明涉及免疫分析檢測領域。具體而言，本發明涉及一種檢測人體體液中甲狀腺球蛋白的免疫層析檢測試紙的制備方法及應用，一種應用雙抗夾心法原理的膠體金免疫層析法。

背景技術

甲狀腺球蛋白(thyroglobulin，TG)是由甲狀腺濾泡上皮細胞合成的一種大分子碘化糖蛋白，是甲狀腺濾泡內膠質的主要成分，由甲狀腺濾泡上皮合成的甲狀腺激素(T4)與TG相結合，成為結合型甲狀腺素，以該種形式儲存在濾泡腔中，成為甲狀腺素庫，該形式的甲狀腺素沒有生物活性，只有在蛋白水解酶的作用下，將甲狀腺素從TG上水解下來成為游離型甲狀腺素(FT4)才有生物活性。在正常情況下，只有極微量的TG進入血液循環，為同源二聚體，分子質量約660kDa。人的構成此種蛋白質的亞基由2767個氨基酸殘基組成。甲狀腺球蛋白是人體內碘在甲狀腺腺體的貯存形式，經水解可生成甲狀腺素和3，5，3′-三碘甲腺原氨酸。

甲狀腺球蛋白在血液中的正常值為11.4-20.2mg/L，凡是導致甲狀腺濾泡細胞破壞的病理狀況均可使血清中TG升高，如分化型甲狀腺癌(乳頭狀癌及濾泡狀癌)、結節性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤囊性變、亞急性甲狀腺炎以及慢性淋巴細胞性甲狀腺炎等，異常結果常見于：(1)血清TG的改變較多見于甲狀腺部位的惡性腫瘤，如TG在甲狀腺濾泡狀癌、甲狀腺乳頭狀癌和間變癌患者的血清中都可出現不同程度的升高；而甲狀腺髓樣癌血TG可正常或降低,前者主要是因為甲狀腺的破壞以及腫瘤組織分泌一定量的TG，而致血中TG升高；后者的腫瘤組織來源于甲狀腺C細胞，而非甲狀腺上皮細胞，故其血清TG并不升高。(2)甲狀腺功能亢進癥、甲狀腺瘤、亞急性甲狀腺炎以及慢性淋巴細胞性甲狀腺炎等甲狀腺疾病都可出現血中TG水平升高。由于分化型甲狀腺癌(differentiatedthyroid carcinoma，DTC)的分化程度較高，故其癌細胞可以合成TG。因此，當DTC患者行甲狀腺全切除及/行¹³¹I清甲治療后，血清中不應該檢測出TG，或TG的濃度很低，如果發現血清中TG濃度升高，說明有DTC的復發轉移。同理，如果淋巴結內有DTC轉移，其組織液中的TG濃度也要升高。

因此目前國內外有關甲狀腺癌的診療指南均推薦對DTC患者在接受甲狀腺全切除以及/¹³¹I清甲治療后的隨訪中，主要依靠檢測血清中TG濃度和超聲等其他影像學檢查來判斷是否有甲狀腺癌的復發轉移。臨床醫生可通過血清中的TG濃度進行持續動態監測，了解上述患者的疾病發展和腫瘤負荷情況。研究已證實，上述DTC患者在TSH刺激后(TSH>30mIU/L)且無抗甲狀腺球蛋白自身抗體(TgAb)干擾的前提下，血清TG對判斷DTC殘留或復發的診斷敏感性與特異性最高。指南并推薦，可以通過對懷疑有頸淋巴結轉移的DTC患者在超聲引導下對目標淋巴結行細針穿刺涂片細胞學檢查+洗脫液TG濃度檢測。近年研究發現，FNA洗脫液TG濃度檢測對診斷DTC淋巴結轉移的準確性高于細胞學檢查。

免疫層析法(Immunochromatography)是近幾年來興起的一種快速診斷技術，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜的某一區帶，當干燥的纖維素一端浸入樣品(組織液或血液)后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，如果樣品中含有相應的抗原即與該抗體發生特異性結合，形成肉眼可見的檢測帶。現有的免疫層析試紙條產品常用的示蹤標記粒子有納米金、納米硒、彩色膠乳等等，其中納米金應用最為廣泛，納米金也稱為膠體金。

以膠體金作為示蹤標記物的免疫層析技術特稱為免疫膠體金技術(Immunecolloidal gold technique，GICT)。膠體金是由氯金酸(HAuCl₄)在還原劑如白磷、抗環血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態而得名。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團型成牢固結合，由于這種結合式靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其他生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、型狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

與現有血凝法、放免法(RIA)、免放法(IMA)以及法學發光法檢測相比，免疫層析法檢測的優點主要包括：

(1)使用方便快速，便于基層使用和現場使用，所有反應能在20分鐘內完成；