[發(fā)明專利]一種從北葶藶子中提取硫苷黃酮類化合物的方法及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710978414.5
• 申請日: 2017-10-18
• 公開（公告）號: CN107602629A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭曉珂;李孟;曾夢楠;張靖柯;趙璇;呂錦錦;張志廣;馮衛(wèi)生
• 申請（專利權(quán)）人: 河南中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/07;A61P5/30
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務(wù)所(普通合伙)41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種從北葶藶子中提取硫苷黃酮類化合物北葶新黃酮A、北葶新黃酮B，分子結(jié)構(gòu)式為：

2.權(quán)利要求1所述的從北葶藶子中提取硫苷黃酮類化合物的方法，其特征在于，將北葶藶子230-260℃炒制5-6min，炒制后，每次加北葶藶子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合并三次提取液，減壓濃縮至相當(dāng)于含生藥2g/mL的浸膏狀，在室溫條件下，浸膏加入浸膏5倍體積量、體積濃度為80％的乙醇醇沉，靜置1h，將上清液倒出，再次加入浸膏5倍體積量、體積濃度為80％的乙醇醇沉，如此反復(fù)操作4次，合并上清液，濃縮至無醇味，上DianionHP-20柱，依次用水、體積濃度20％、40％、60％乙醇梯度洗脫，流速6mL/min，每個部位的流動相用量為柱體積的10倍；收集60％乙醇洗脫液，濃縮干燥，得60％乙醇洗脫部位組分A；組分A用組分A 5倍重量的水溶解，在20℃下6000r/min離心15min，所得上清液記為水溶物組分B1，離心之后的沉淀記為水不溶物組分B2；組分B2用甲醇溶解，硅膠拌樣，組分B2與硅膠重量比1:1，以二氯甲烷和甲醇的混合液為流動相梯度洗脫，流速10mL/min，所用二氯甲烷和甲醇混合液的比例依次為100:0、20:1、10:1、5:1、1:1，每200ml檢識一次，每個梯度流動相的用量以茴香醛-濃硫酸薄層檢識來判斷，3d洗脫完畢，合并二氯甲烷：甲醇＝20:1的流份，標(biāo)為組分C2；組分C2用70％甲醇溶解，通過Sephadex LH-20柱色譜，用70％甲醇洗脫，流速0.8mL/min，以茴香醛-濃硫酸薄層檢識，合并210-240mL的流份標(biāo)為組分F4，組分F4用半制備HPLC分離，上規(guī)格型號：250×10mm、粒徑5μm、孔徑12nm的YMC-Pack ODS-AA色譜柱，流動相為體積比25：75的乙腈：三氟乙酸水溶液，三氟乙酸水溶液質(zhì)量濃度為0.03％，流速3ml/min，收集保留時間t_R＝32.0～33.0min的流份，濃縮干燥，得化合物北葶新黃酮A，收集保留時間t_R＝38.0～39.0min的流份，濃縮干燥，得化合物北葶新黃酮B。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從北葶藶子中提取硫苷黃酮類化合物的方法，其特征在于，取北葶藶子10kg，240℃炒制5.5min，炒制后，每次加北葶藶子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合并三次提取液，減壓濃縮至相當(dāng)于含生藥2g/mL的浸膏狀，在室溫條件下，浸膏加入體積濃度為80％的乙醇25L醇沉，靜置1h，將上清液倒出，再次體積濃度為80％的乙醇25L醇沉，如此反復(fù)操作4次，合并上清液，濃縮至無醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、體積濃度20％、40％、60％乙醇梯度洗脫，流速6ml/min，每個部位的流動相用量為柱體積的10倍；收集60％乙醇洗脫液，濃縮干燥，得60％乙醇洗脫部位組分A；組分A用組分A 5倍重量的水溶解，在20℃下6000r/min離心15min，所得上清液記為水溶物組分B1，離心之后的沉淀記為水不溶物組分B2；組分B2用甲醇溶解，硅膠拌樣，組分B2與硅膠重量比1:1，以二氯甲烷和甲醇的混合液為流動相梯度洗脫，流速10ml/min，所用二氯甲烷和甲醇混合液的比例依次為100:0、20:1、10:1、5:1、1:1，每200ml檢識一次，每個梯度流動相的用量以茴香醛-濃硫酸薄層檢識來判斷，3d洗脫完畢，合并二氯甲烷：甲醇＝20:1的流份，標(biāo)為組分C2；組分C2用70％甲醇溶解，通過Sephadex LH-20柱色譜，用70％甲醇洗脫，流速0.8ml/min，以茴香醛-濃硫酸薄層檢識，合并210-240mL的流份標(biāo)為組分F4，組分F4用半制備HPLC分離，上規(guī)格型號：250×10mm、粒徑5μm、孔徑12nm的YMC-Pack ODS-AA色譜柱，流動相為體積比25：75的乙腈：三氟乙酸水溶液，三氟乙酸水溶液質(zhì)量濃度為0.03％，流速3ml/min，收集保留時間t_R＝32.0～33.0min的流份，濃縮干燥，得化合物北葶新黃酮A，收集保留時間t_R＝38.0～39.0min的流份，濃縮干燥，得化合物北葶新黃酮B。

4.權(quán)利要求1所述的硫苷黃酮類化合物北葶新黃酮A和北葶新黃酮B在制備雌激素樣作用藥物中的應(yīng)用。