[發明專利]獲得甘蔗健康種苗的方法

在審

• 申請號: 201710977035.4
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107517855A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 陳保善;溫榮輝;王鳳林;林垠孚;張莉娟
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00;C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 楊立華

1.一種獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于對甘蔗植株分別進行SCBV、Lxx、SrMV、SCMV和ScYLV的PCR檢測，將檢測健康的甘蔗植株移種到具有隔離保護措施的網室大棚內，作為健康甘蔗種源以及為組培擴繁提供外植體材料。

2.根據權利要求1所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于所述PCR檢測按以下操作進行：先提取甘蔗植株葉片的DNA，檢測SCBV和Lxx，再對不帶SCBV和Lxx的樣品提取RNA，檢測SrMV、ScMV、ScYLV，以上病毒害均不帶者即為健康的甘蔗植株。

3.根據權利要求2所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于所述PCR檢測各病毒害的PCR引物分別為：

SrMV：F：ACAGCAGAWGCAACRGCACAAGC，R：CTCWCCGACATTCCCATCCAAGCC；

SCMV：F：AATCTTGAGGAATGCGGAAAAC，R：ATCGATAGGCCCACAAATGAGTCT；

ScYLV：F：AATCAGTGCACACATCCGAG，R：GGAGCGTCGCCTACCTATT；

SCBV：F：GATGGATGACTGTTTCAGAGGC，R：GAGGGATGGTAAGATTTGGC；

Lxx：1：CCGAAGTGAGCAGATTGACC，2：ACCCTGTGTTGTTTTCAACG。

4.根據權利要求3所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于包括以下步驟：

A、健康甘蔗植株的篩選；

B、健康甘蔗植株的隔離保存；

C、健康外植體的培育；

D、健康種苗的擴繁。

5.根據權利要求4所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于步驟A按以下操作進行：

從甘蔗種植大田中采集長勢良好、外觀沒有病害癥狀的甘蔗植株葉片，對這些甘蔗植株進行SrMV、SCMV、ScYLV、SCBV和Lxx病毒害檢測，先提取這些葉片的DNA，檢測SCBV和Lxx；再對不帶SCBV和Lxx樣品的樣品提取RNA，檢測SrMV、SCMV、ScYLV，以上病毒害均不帶者即為健康甘蔗。

6.根據權利要求4所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于步驟B按以下操作進行：

將經檢測的健康甘蔗植株移種到具有隔離保護措施的網室大棚中。

7.根據權利要求4所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于步驟C按以下操作進行：

①外植體處理：去除蔗芽的外層老葉，經75％酒精消毒后放入滅菌的超凈臺，取芽尖2-3mm的生長點接種；或者用甘蔗頂端去除老葉的分生組織作為外植體，需先用75％酒精消毒15min，再經升汞消毒30min，蒸餾水翻轉震蕩洗滌3-4遍，每遍洗滌5min，將消毒后的分生組織放入滅菌的超凈臺，再去除1-2層老葉，將其切成1-2mm厚的薄片接種；

②誘導與分化：將步驟①中獲得的外植體接種在誘導培養基上，每瓶接種2個芽尖或5個分生組織薄片；當形成愈傷組織時將其轉接到分化培養基上，每瓶接種四塊，誘導與分化的培養條件均為溫度29-31℃、光強2300Lx左右；

③生根培養與假植：將分化出嫩葉的組培苗轉接到生根培養基上，置于29-31℃、2300Lx左右光強度的條件培養25天長成完整植株；經煉苗后將組培苗假植在大棚內的沙床上，26-28天即可移種。

8.根據權利要求7所述的獲得甘蔗健康種苗的方法，其特征在于步驟C中：

誘導培養基為MS+3.0mg/L 2，4-D+3％檸檬酸+3％Sugar+0.6％Agar，

分化培養基為MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+3％檸檬酸+3％Sugar+0.6％Agar，

生根培養基為1/2MS+4.0mg/L NAA+3％Sugar+0.6％Agar。