[發(fā)明專利]一種小花山奈的組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710969730.6
• 申請日: 2017-10-18
• 公開（公告）號: CN107593443B
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李冬梅
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 44245 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 向玉芳

本發(fā)明公開了一種小花山奈的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。該方法包括外植體前處理、芽基部增殖、叢生芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根壯苗和煉苗移栽。將消毒好的芽基部外植體接種到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，直至外植體基部形成球狀；切割增殖的芽基部，轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽；當(dāng)繼代叢生芽苗高4～6cm時(shí)，切下叢生芽轉(zhuǎn)移至壯苗生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)壯苗生根培養(yǎng)基上的苗高6～8cm時(shí)，在溫室自然光照下煉苗7～10d，取出苗，洗凈根部培養(yǎng)基，培養(yǎng)后得到移栽苗。本發(fā)明可在短期內(nèi)獲得能保持母株優(yōu)良性狀的組培苗，對母株損傷不大，投入低產(chǎn)出高，可提供大量的小花山奈組培苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及小花山奈，具體涉及一種小花山奈的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

姜科(Zingiberaceae)植物可通過播種、切分根莖、扦插和組織培養(yǎng)的方法繁殖(高江云等，2006；熊友華等，2005，2007；吳繁花等，2009；黃賽等，2016；吳德鄰等，2016；李冬梅等，2017)。小花山奈(Kaempferia parviflora)屬于姜科山奈屬(Kaempferia)植物，株高約30cm，葉叢生，葉片橢圓形，葉面綠色，葉緣紅色，葉背具暗紅色斑紋；花序包藏于一鐘狀總苞內(nèi)，花多數(shù)較小，依次開放，花白色，唇瓣具紫紅色斑紋；花期5‐10月；根莖塊狀，藥用；觀葉類，株形好，葉漂亮可賞，可作為室內(nèi)觀葉和林下地被植物(高江云等，2006；吳德鄰等，2016)。小花山奈由于不結(jié)果，故不能進(jìn)行播種繁殖；其也沒有莖桿，也不能用扦插繁殖；其根莖塊狀，也不能用帶葉根莖扦插；因此，只能采用切分根莖和組織培養(yǎng)的方法繁殖。但因?yàn)槟副玖坎蛔悖蟹指o分株繁殖速度慢，而且對母株損傷也很大，短期內(nèi)得不到大量種苗。

姜科山奈(Kaempferia galanga)的組織培養(yǎng)選用塊莖上剛萌發(fā)的芽為外植體時(shí)，采用75％酒精消毒1min，無菌水漂洗1次，0.1％升汞消毒10min，無菌水漂洗2次，0.1％升汞消毒6min的消毒效果最好，存活率平均達(dá)56.66％，其污染率只有6.67％，但外植體存活數(shù)天后，植株有細(xì)菌污染現(xiàn)象，這可能是山奈自身帶有內(nèi)生菌所致，導(dǎo)致外植體滅菌困難(吳繁花等，2009)。由于山奈屬植物的多樣性和塊莖自身帶有內(nèi)生菌，故采用常規(guī)組織培養(yǎng)的消毒程序滅菌困難。山奈塊莖剛萌發(fā)的芽為外植體時(shí)，適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6‐BA3.0mg/L+NAA 0.1mg/L，芽的萌發(fā)率達(dá)100％，分化率為146.67％(吳繁花等，2009)。但取小花山奈塊莖上萌發(fā)的芽基部為外植體時(shí)，接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6‐BA 3.0‐5.0mg/L+NAA0.1mg/L+椰汁10.0％+蔗糖20g/L+卡拉膠粉9.5g/L，芽的誘導(dǎo)率為0。目前，尚未見對小花山奈進(jìn)行組織培養(yǎng)和種苗大規(guī)模生產(chǎn)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題在于提供一種小花山奈的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，可在短期內(nèi)獲得大量性狀穩(wěn)定的種苗，能保持母株的優(yōu)良特性，具有投入低產(chǎn)出高的優(yōu)勢。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種小花山奈的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：

(a)外植體前處理：采集小花山奈的根莖用自來水清洗干凈，剪掉根莖上的須根后，消毒后晾干；再放入洗凈消毒的河沙中，恒溫發(fā)芽，洗凈根莖芽，取其芽基部為外植體材料；

(b)芽基部增殖：將消毒好的芽基部外植體接種到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，直至外植體基部形成球狀；所述的芽基部增殖培養(yǎng)基成分為MS、6‐芐氨基腺嘌呤8.0～10.0mg/L、奈乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉膠粉9.5～10.0g/L；

(c)叢生芽誘導(dǎo)：切割增殖的芽基部，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生芽；所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為MS、6‐芐氨基腺嘌呤3.0～5.0mg/L、奈乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉膠粉9.5～10.0g/L；