[發明專利]一種小花山奈的組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201710969730.6
• 申請日: 2017-10-18
• 公開（公告）號: CN107593443B
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 李冬梅
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院環境園藝研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 44245 廣州市華學知識產權代理有限公司
• 代理人: 向玉芳

1.一種小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟：

（a）外植體前處理：采集小花山奈的根莖清洗干凈，剪掉根莖上的須根后，消毒后晾干；再放入洗凈消毒的河沙中，恒溫發芽，至根莖芽的芽高為2～5 cm，洗凈根莖芽，切掉根莖芽上的莖尖后留下的1～2 cm的芽基部為外植體材料；

（b）芽基部增殖：將消毒好的芽基部外植體接種到增殖培養基上培養，直至外植體基部形成球狀；

（c）叢生芽誘導：切割增殖的芽基部，轉接到誘導培養基中誘導叢生芽；所述誘導培養基成分為MS、6-芐氨基腺嘌呤3.0～5.0 mg/L、奈乙酸0.01～0.10 mg/L、椰汁10.0～15.0%、蔗糖20～30 g/L、卡拉膠粉9.5～10.0 g/L；

（d）繼代增殖：將誘導出的不定芽切掉葉片和莖后留芽基部，繼代培養于增殖培養基中繼續增殖芽基部；

（e）生根壯苗：當繼代叢生芽苗高4～6 cm時，切下接種到生根培養基中，所述生根培養基成分為MS、奈乙酸0.10～0.50 mg/L、香蕉泥10.0～15.0%、活性炭0.5～1.0 g/L、蔗糖20～30 g/L、卡拉膠粉9.5～10.0 g/L；

（f）煉苗移栽：當生根培養基上的苗高6～8 cm時，在溫室自然光照下煉苗7～10 d，取出瓶苗，洗凈根部培養基，消毒后，移栽到泥炭類基質中，保持通風透氣，濕度在70～85%，溫度在20～32℃，自然光照條件培養后得移栽苗；

步驟（b）和步驟（d）所述的增殖培養基成分為MS、6-芐氨基腺嘌呤8.0～10.0 mg/L、奈乙酸0.01～0.10 mg/L、椰汁10.0～15.0%、蔗糖20～30 g/L、卡拉膠粉9.5～10.0 g/L。

2.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟（a）所述的消毒后晾干的消毒是將小花山奈的根莖放入質量濃度0.1～0.3%的多菌靈粉劑溶液中浸泡消毒30～40 min，然后再放入質量濃度0.1～0.3%的高錳 酸鉀溶液浸泡消毒30～40min；步驟（a）所述的洗凈消毒的河沙是將河沙先用滅菌水沖洗3～4次，再用質量濃度0.1～0.3%的高錳 酸鉀溶液浸泡消毒3～5 h，然后室溫晾干。

3.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟（a）所述的恒溫發芽是在培養箱中30～33℃下進行。

4.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于：以質量百分比濃度計，步驟b）所述外植體的消毒是先用0.1～0.3%高錳酸鉀溶液浸泡根莖芽30～40min，再在自來水下反復沖洗根莖芽30～40 min；晾干表面水分后，在超凈工作臺上，切掉根莖芽上的莖尖，留2～3 cm高的根莖芽基部，用棉球蘸取70%酒精擦拭芽基部，最后用0.1～0.2%升汞溶液消毒12～15 min，滅菌水沖洗4～5次，切掉距離芽基部兩頭各0.3～0.5 cm的部分，留1～2 cm的根莖芽基部，并將根莖芽基部接種到芽基部增殖培養基中。

5.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于：步驟（f）中如果溫度高于32℃，用風機和水簾降溫。

6.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述增殖培養基、誘導培養基和生根培養基的pH都為5.6～5.8；培養基滅菌條件為125℃，30～40 min。

7.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于：步驟（b）、步驟（c）、步驟（d）和步驟（e）培養的溫度為25～30 ℃，光照強度為2000～2300 lx，光照時間控制為14 h/d。

8.根據權利要求1所述的小花山奈的組織培養快速繁殖方法，其特征在于：步驟（f）所述消毒使用百菌清溶液消毒，百菌清溶液的濃度為0.1～0.3%，消毒浸泡的時間為30～40min。