[發明專利]一種核酸適配體熒光試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710969466.6
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107796938B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 陳愛亮;張桂蘭;朱超;楊曙明
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/559
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李佳

本發明提供了一種核酸適配體熒光試紙條及其制備方法和應用，涉及生物檢測技術領域。一種核酸適配體熒光試紙條，包括底板、樣品墊、納米材料墊、反應膜以及吸水墊，反應膜設有檢測線，檢測線設置于靠近納米材料墊的一端；納米材料墊附著有熒光素標記的核酸適配體和/或熒光標記的帶有連接序列的核酸適配體以及游離熒光素，檢測線固定有核酸適配體的互補鏈或核酸適配體連接序列的互補鏈。試紙條結構簡單，檢測靈敏，準確度高。一種核酸適配體熒光試紙條的制備方法，包括：將樣品墊、納米材料墊、反應膜以及吸水墊依次粘貼至底板的同一側。操作簡單，靈活性強。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體而言，涉及一種核酸適配體熒光試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

試紙條作為一種簡單快速的分析工具已被廣泛用于臨床診斷、食品安全以及環境監測中。目前試紙條主要有膠體金和熒光兩種檢測方式，其中膠體金試紙條通過顯色反應來顯示結果，具有肉眼可見無需其他儀器的優點；但其缺點是靈敏度低，且只能通過比較顏色深淺達到半定量的目的。相對于膠體金試紙條，熒光試紙條靈敏度高，搭配便攜式的熒光檢測儀可以對樣品中的靶標物進行精確定量，因此成為近年來試紙條發展的方向。

但是無論膠體金試紙條還是熒光試紙條，目前基本都是基于抗原抗體反應的試紙條，抗原抗體作為活性蛋白需要低溫儲運保存，因此貨架期較短，限制了該技術在偏遠條件落后地區的應用。而且由于很多小分子物質制備半抗原困難，難以刺激產生高親和力的抗原抗體，更是限制了這一技術的應用。

核酸適配體是近年來新發現的一類識別分子，主要是指長度在10-100堿基之間的單鏈DNA，能夠通過構象折疊后與靶標分子高親和力高特異性結合。核酸適配體是通過體外篩選得來的，因此與抗體相比，其靶標不受限制，小到金屬離子大到蛋白質分子都可以篩選適配體，篩選的適配體經測序后可以批量合成，易于修飾，穩定性好，能夠代替抗體被用于各式各樣的抗體分析方法中，因此也被成為化學抗體。

同樣的核酸適配體也被代替抗體用于試紙條開發中，其原理類似于傳統的試紙條。但是目前基于核酸適配體的膠體金或熒光試紙條并不多，其主要原因是不同適配體序列長度不一，大部分適配體序列比較長，因此和互補鏈形成雙鏈的親和力要大于適配體和靶標形成復合物的親和力，因此導致已經結合了靶標的適配體在檢測線處仍然發生解離，無法實現對靶標的精確檢測。檢測線固定抗原雖然使得競爭力一致，但對于很多小分子靶標來說與偶聯蛋白結合后限制了與適配體的結合，使得適配體無法在檢測線處結合，無法實現靈敏和準確檢測。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提出了一種核酸適配體熒光試紙條，結構簡單，檢測靈敏，準確度高。

本發明又提出了一種核酸適配體熒光試紙條的制備方法，操作簡單，靈活性強。

本發明是這樣實現的：

本發明提出一種核酸適配體熒光試紙條，包括底板、樣品墊、納米材料墊、反應膜以及吸水墊，樣品墊、納米材料墊、反應膜以及吸水墊的端部依次連接形成檢測層，檢測層與底板連接，反應膜設有檢測線和質控線，檢測線設置于靠近納米材料墊的一端，質控線設置于靠近吸水墊的一端；

納米材料墊附著有熒光素標記的核酸適配體和/或熒光標記的帶有連接序列的核酸適配體以及游離熒光素，檢測線固定有核酸適配體的互補鏈或核酸適配體連接序列的互補鏈，質控線處設置有與熒光素相對應的抗熒光素抗體。

本發明提出一種核酸適配體熒光試紙條的制備方法，包括：將樣品墊、納米材料墊、反應膜以及吸水墊依次粘貼至底板的同一側。

本發明提出一種核酸適配體熒光試紙條在食品安全、環境監測以及臨床診斷中的應用。

上述方案的有益效果：