[發明專利]一種土牛膝離體組培快繁方法

在審

• 申請號: 201710967518.6
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107593442A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 李正美
• 申請（專利權）人: 李正美
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所45109
• 代理人: 盧翔飛

技術領域

本發明屬于培育技術領域，具體地說，涉及一種土牛膝離體組培快繁方法。

背景技術

土牛膝又名：倒如草、倒鉤草、破布粘、牛咬膝、白牛膝。土牛膝屬多年生草本，高1~1.5厘米。莖直立，四方形，節膨大。葉對生，葉片披針形或狹披針形，先端及基部均漸尖，全緣，上面綠色，下面常呈紫紅色。7~10月開花，穗狀花序腋生或頂生，花多數，苞片1，先端有齒，小包片2，刺狀，紫紅色，基部兩側各有1卵圓形小裂片，雄蕊5，花絲下部合生了，退化雄蕊方形，先端具不明顯的齒，花柱長約2厘米。8~11月結果，果長卵形。冬、春間或秋季采根，曬干備用。土牛膝生長于河南省，但河北、山西山東及兩廣均有分布。生于林邊、路旁及曠地上，亦可栽種于庭院中。土牛膝性平、味苦酸。具有活血散瘀，祛濕利尿，清熱解毒功效。由于藥效有奇效，人們濫挖濫砍，造成土牛膝日趨銳減，自然采摘已成難事。為此，必須盡快研制出一套新方法加大加快繁殖力度，滿足市場需要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以土牛膝種子為外植體，通過愈傷組織誘導、增殖、分化、生根、煉苗移栽等過程成功獲得土牛膝離體再植株，建立土牛膝組織培養快速繁殖技術體系，設備簡單，操作容易，見效快，繁育的樹苗粗壯，成活率高的具良好的生態效益、經濟效益和社會效益的一種土牛膝離體組培快繁方法。

本發明一種土牛膝離體組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）無菌苗的獲得：選取飽滿的土牛膝種子,用75%酒精消毒65s，再用0.1%升汞溶液消毒15min，最后用無菌水漂洗4次，用無菌濾紙吸干表面水分后接種到種子萌發培養基中，接種后每天光照21小時，光照強度為2500lx，培養溫度為22℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養20天后統計萌發率，萌發培養基為：1/2MS+0.06mg/LNAA+29g/L蔗糖+6.8g/L瓊脂，pH為5.9；

（2）愈傷誘導：當無菌苗的子葉剛展開時,取無菌苗的莖尖作為外植體,用解剖刀切成0.6cm左右長度,接種于用于愈傷誘導的培養基中培養，接種后每天光照11小時，光照強度為2500lx，培養溫度為22℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養26天后統計誘導率，愈傷誘導培養基為：MS+6.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+0.8mg/L KT+28g/L蔗糖+5.8g/L瓊脂，pH為5.9；

（3）增殖培養：將步驟（2）誘導得到的愈傷組織切割成0.6cm³大小的小塊并轉入增殖培養基進行擴繁，接種后每天光照11小時，光照強度為3200lx，培養溫度為22℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養26天后統計增殖情況，增殖培養基為：MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+26g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.9；

（4）分化培養：將步驟（3）增殖得到的愈傷組織切割成0.6cm³大小的小塊并轉入分化培養基誘導不定芽的產生，接種后每天光照11小時，光照強度為3200lx，培養溫度為22℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養26天后統計分化情況，分化培養基為：MS+1.2mg/LKT+2.2mg/LNAA+26g/L蔗糖+5.08g/L瓊脂，pH為5.9；

（5）生根培養：將步驟（4）分化得到不定芽從基部切下并接種至生根培養基中進行誘導生根，接種后每天光照11小時，光照強度為3200lx，培養溫度為22℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養26天后統計生根情況，生根培養基為：1/2MS+1.2mg/LIBA+0.8mg/L NAA+1.25%活性炭+26g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8；

（6）煉苗移栽：生根28天后,打開其瓶口,并灌入無菌水,以保證其水分供應，6天后取出生根苗洗凈根上所帶培養基,移栽到由泥炭土:珍珠巖:蛭石＝2:2:1組成的基質中，用留有透氣孔的薄膜覆蓋,放置在陰涼透氣的室內,16天將薄膜揭去,然后室外培養,隔天澆一次水,移栽26天后統計成活率。

本發明的優點是：以土牛膝種子為外植體，通過愈傷組織誘導、增殖、分化、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了土牛膝離體再植株，建立土牛膝組織培養快速繁殖技術體系，為節約栽培生產中的用種量，提高其藥材的產量提供了一條行之有效的途徑。設備簡單，操作容易，成本低，快繁快育。

具體實施方式

以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1