[發(fā)明專利]一種土牛膝離體組培快繁方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710967518.6
• 申請(qǐng)日: 2017-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN107593442A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李正美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李正美
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標(biāo)代理事務(wù)所45109
• 代理人: 盧翔飛

1.一種土牛膝離體組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）無(wú)菌苗的獲得：選取飽滿的土牛膝種子,用75%酒精消毒65s，再用0.1%升汞溶液消毒15min，最后用無(wú)菌水漂洗4次，用無(wú)菌濾紙吸干表面水分后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，接種后每天光照21小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)20天后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，萌發(fā)培養(yǎng)基為：1/2MS+0.06mg/LNAA+29g/L蔗糖+6.8g/L瓊脂，pH為5.9；

（2）愈傷誘導(dǎo)：當(dāng)無(wú)菌苗的子葉剛展開時(shí),取無(wú)菌苗的莖尖作為外植體,用解剖刀切成0.6cm左右長(zhǎng)度,接種于用于愈傷誘導(dǎo)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種后每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)26天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率，愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+0.8mg/L KT+28g/L蔗糖+5.8g/L瓊脂，pH為5.9；

（3）增殖培養(yǎng)：將步驟（2）誘導(dǎo)得到的愈傷組織切割成0.6cm³大小的小塊并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)繁，接種后每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為3200lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)26天后統(tǒng)計(jì)增殖情況，增殖培養(yǎng)基為：MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+26g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.9；

（4）分化培養(yǎng)：將步驟（3）增殖得到的愈傷組織切割成0.6cm³大小的小塊并轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生，接種后每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為3200lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)26天后統(tǒng)計(jì)分化情況，分化培養(yǎng)基為：MS+1.2mg/LKT+2.2mg/LNAA+26g/L蔗糖+5.08g/L瓊脂，pH為5.9；

（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）分化得到不定芽從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為3200lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)26天后統(tǒng)計(jì)生根情況，生根培養(yǎng)基為：1/2MS+1.2mg/LIBA+0.8mg/L NAA+1.25%活性炭+26g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8；

（6）煉苗移栽：生根28天后,打開其瓶口,并灌入無(wú)菌水,以保證其水分供應(yīng)，6天后取出生根苗洗凈根上所帶培養(yǎng)基,移栽到由泥炭土:珍珠巖:蛭石＝2:2:1組成的基質(zhì)中，用留有透氣孔的薄膜覆蓋,放置在陰涼透氣的室內(nèi),16天將薄膜揭去,然后室外培養(yǎng),隔天澆一次水,移栽26天后統(tǒng)計(jì)成活率。