[發(fā)明專利]一種胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物的親和層析純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710966913.2
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN108570118B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張居作;范秀軍;張鍵;程國鋼;陳指龍;張保珍;肖仲琳;韓金雨
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物的純化方法，所述純化方法為以親和層析的方法對胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物進行層析純化，其中親和層析柱材為重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白與親和層析基質(zhì)的偶聯(lián)物，所述層析純化的方法為將胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物粗品上樣于親和層析柱上，并以洗滌液進行洗滌至沒有雜質(zhì)流出，再以洗脫液進行洗脫并收集胎盤樣硫酸軟骨素A純品或其衍生物純品；

重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白與親和層析基質(zhì)的偶聯(lián)物中，所述的重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白為瘧原蟲感染紅細胞表面抗原VAR2CSA與pl-CSA最小結(jié)合部分重組合成的重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白，且重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白末端鏈接His標簽，此重組蛋白與親和層析基質(zhì)通過化學(xué)鍵進行偶聯(lián)，所述重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白的序列如SEQ ID No.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物粗品上樣與層析柱材體積比為1：0.5-2，親和層析所用的洗滌劑pH值為7-9，洗脫劑pH值為2-4。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物粗品上樣與層析柱材體積比為1：0.8-1.2，洗滌劑pH值為7-8，洗脫劑pH值為2.2-3.6。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物粗品上樣與層析柱材體積比為1：1，洗滌劑pH值為7.2，洗脫劑pH值為3.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，所述洗脫劑中包含保護劑，所述保護劑為甘氨酸、維生素C、維生素E、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、甲硫氨酸、硫脲、乙二胺四醋酸二鈉、枸櫞酸中的一種或幾種的組合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，當(dāng)以洗脫液進行洗脫后，檢測流出物的pH值，當(dāng)pH＜6.8且紫外檢測儀有紫外吸收時開始收集胎盤樣硫酸軟骨素A純品或其衍生物純品。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，洗滌液的洗脫體積為3倍以上柱體積，洗脫液的洗脫體積為5倍以上柱體積。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的純化方法，洗滌液的洗脫體積為5倍以上柱體積，洗脫液的洗脫體積為8倍以上柱體積。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的純化方法，洗滌液的洗脫體積為5-10倍柱體積，洗脫液的洗脫體積為10倍柱體積。

10.一種用于純化胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物的層析柱材，其為重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白與親和層析載體的偶聯(lián)物，所述的重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白為瘧原蟲感染紅細胞表面抗原VAR2CSA與pl-CSA最小結(jié)合部分重組合成的重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白，且重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白與親和層析基質(zhì)通過化學(xué)鍵進行偶聯(lián)，所述重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白的序列如SEQ ID No.2所示。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的的層析柱材，所述親和層析載體選自瓊脂糖、纖維素、交聯(lián)葡聚糖、聚丙烯酰胺、多孔玻璃珠中的一種或多種。

12.如權(quán)利要求10中所述的重組瘧原蟲感染紅細胞表面抗原蛋白與親和層析載體的偶聯(lián)物作為親和層析純化柱材中的用途。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，所述用途為作為用于純化胎盤樣硫酸軟骨素A或其衍生物的親和層析純化柱材中的用途。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，所述胎盤樣硫酸軟骨素A衍生物選自具有硫酸軟骨素A的蛋白、硫酸軟骨素A蛋白聚糖、被硫酸軟骨素A修飾的胎盤源外泌體中一種或多種。